产间苯三酚的海洋生境假单胞菌的 筛选与代谢调节-微生物应用工程专业论文.docxVIP

万方数据 万方数据 青岛科技大学研究生学位论文 青岛科技大学研究生学位论文 产间苯三酚的海洋生境假单胞菌的筛选与代谢调节 摘 要 间苯三酚(Phloroglucinol)具有良好的抗菌、抗病毒作用。同时可作为制备黄酮、异 黄酮等抗癌、抗心血管疾病类药物的中间体，有着非常广阔的市场前景。化学合成污染 存在较多弊端，对环境友好的生物合成受到关注，微生物资源具有较好的优势，经文献 查证，假单胞菌是间苯三酚及其衍生物的唯一天然来源，但尚未有海洋生境假单胞菌产 间苯三酚的报道。本研究通过分离南海海洋低等动物及渤海潮间带海藻与沉积物样品， 得到了两百多株海洋生境假单胞菌，通过对这些菌株进行化学与基因筛选，最终得到两 株产间苯三酚的海洋生境假单胞菌。对野生型产间苯三酚菌株进行紫外与微波的多重诱 变育种，得到了间苯三酚产量明显提高的高产菌株，在此基础上进行培养基优化与代谢 调节，进一步提高了突变株间苯三酚的产量，具体结果如下： 1.通过三种不同的选择性培养基对来自南海海洋低等动物与渤海潮间带海藻和沉积 物样品进行分离，结果发现三种选择性培养基中 S1 培养基分离效果最好，假单胞菌的 获得率最高为 92.7%，KB+培养基次之，假单胞菌的获得率为 79.2%，普通 KB 培养基 假单胞菌的获得率为 34.9%。 2.由基因探针筛选法获得2株产间苯三酚的野生型假单胞菌株，经16S rDNA基因序 列与GenBank进行相似性比较及生理生化测试，分别鉴定LBF-93为荧光假单胞菌 Pseudomonas fluorescens ，LBF-96为芸薹假单胞菌Pseudomonas brassicacearum 。 3.对野生型海洋生境假单胞菌 LBF-96 进行紫外与紫外微波的复合诱变，获得突变 株 YLM96-01。菌株 YLM96-01 在培养至 29h 时，间苯三酚的产量为 0.599g/L，与野生 菌株 LBF-96 的产量(0.223g/L)相比提高了 169%。 4.对突变株 YLM96-01 进行培养基优化实验，可知甘油对间苯三酚的产量影响最大， 其次是蛋白胨，最后是葡萄糖。在实验最优的培养基配方下，诱变后菌株 YLM96-01 的 间苯三酚产量为 0.782g/L，比对照间苯三酚的产量提高了 30%。 5.对突变株 YLM96-01 的代谢调节实验发现，加入代谢诱导物柠檬酸对间苯三酚的 产量影响不大。在培养 36h 添加乙醇至 1%的浓度效果最好，菌株间苯三酚的产量较对 照组来说，提高了 29%，而在 YLM96-01 培养至 12h 和 24h 时添加乙醇至 1%的浓度则 明显抑制菌株产间苯三酚的产量。 关键词：间苯三酚 海洋生境假单胞菌 基因筛选 育种 代谢调节 万方数据 I 产间苯三酚的海洋生境假单胞菌的筛选与代谢调节 产间苯三酚的海洋生境假单胞菌的筛选与代谢调节 II 青岛科技大学研究生学位论文 青岛科技大学研究生学位论文 SCREENING AND METABOLIC REGULATION OF PSEUDOMONAS IN MARINE HABITAT THAT PRODUCED PHLOROGLUCINOL ABSTRACT Phloroglucinol has broad market prospect because of the good antibacterial and antiviral activities, and the applications as drugs intermediates of flavones or isoflavones which can cure cancer and cardiovascular disease. For the production of it, more and more attention has been paid to biosynthesis method due to the advantage of environment friendly compared with the chemical synthesis, especially with microorganisms. Previous studies have shown that Pseudomonads were the only natural microbial resources of phloroglucinol and its derivatives, however, there was no reports of phloroglucinol production strains from marine habitats. In this study, two