蛋白质与核酸互作用的试验方法学研究.pptVIP

DNA-蛋白质相互作用研究实验 凝胶阻滞试验 DNaseI足迹试验 甲基化干扰试验 体内足迹试验 酵母单杂交技术 染色质免疫沉淀技术 噬菌体展示技术 核酸适体技术 生物信息学方法 蛋白质芯片技术及纳米技术 一、凝胶阻滞试验（DNA迁移率变动试验DNA mobility shift assay） 凝胶阻滞试验不仅可以用来鉴定在特殊类型细胞的提取物中，是否存在着能够同某一特定DNA片段结合的蛋白质分子(比如特异的转录因子等)，而且还可以用来研究发生此种结合作用之精确的DNA序列的特异性 二、DNaseI足迹试验(DNaseI footprinting assay) 三、甲基化干扰试验 检测靶DNA中特异G残基的优先甲基化对而后的蛋白质结合作用会有什么效应，从而更加详细地揭示DNA与蛋白质之间的相互作用模式。 DMS化学干扰只能在G和A残基甲基化，不能使T和C甲基化。 故本实验为足迹实验的补充手段。 四、酵母单杂交技术 设计含目的基因(称为诱饵)和下游报告基因的质粒并将其转入酵母中; 将文库蛋白的编码基因片段与GAL4转录激活域融合表达的cDNA文库质粒转化入同一酵母中; 若文库蛋白与目的基因相互作用可通过报告基因的表达将文库蛋白的编码基因筛选出来.