《抗生素微生物检定法》精选课件.ppt

* * 多组分的庆大霉素的测定时，因组分配比不完全相同，所以测定误差较大。 所以在已知供试品中添加剂对测定有影响或供试品中赋形剂含量较大时，可在标准品中加入相同量的添加剂或赋形剂，以抵消其影响。 如四环素在pH2.3时，可形成55%C-差向异构体，其生物活性相当于四环素的5%，这样也可使两者的剂量反应直线不平行。所以，标准品与供试品稀释液的放置时间与条件也应相同或尽量相同。 * * * * * * * * * * * * 恒温水浴有使用溶出度仪的、恒温水浴箱的，带有搅拌装置。 比色管 可选择多个实验波长 根据药典采用了3个波长530、580、650，用户可以根据要求进行实验！ 钨灯 滤光片 透镜 培养皿 透镜 接收器 自动判别，生成唯一报告 在生物生长过程中根据生物生长特性，自动判别，生成唯一报告 CBZ-1抗生素比浊法测量仪 对微生物进行在线监测、测控、培养并在线完成测量 CBZ-1抗生素比浊法测量仪 小 结： 抗生素微生物检定法虽然操作繁琐，需培养有经验的操作人员，整个操作过程需时较长，影响因素多，可信限率高，误差相对较大，但在各国药典中仍为不可缺少的部分。 通过仪器精度的提高、培养基质量达到标准化，则微生物检定法的误差会大大降低。 谢 谢 大 家 ！ 题 抗生素微生物检定方法以实验设计原理不同可分为：稀释法、比浊法、琼脂扩散法。各国药典通常采用后两种方法测定抗生素的效价。 中国药典要求在管碟法的二剂量法中，标准品溶液高浓度所致抑菌圈直径在18～22mm。除药典各论另有规定外，本法的可信限率不得超过5%。 中国药典要求在比浊法中，高、低剂量浓度标准品溶液所致的菌液浓度的吸收值在0.3～0.7范围；高、低剂量浓度标准品溶液所致的菌液浓度的吸收值的差值大于0.1。 简述题：简述管碟法的操作步骤 1.预试验：确定最佳的试验条件：调整试验菌的浓度、使用量、抗生素终浓度、培养基等，使抑菌圈的大小符合规定：高剂量浓度溶液所致的抑菌圈直径在18～22mm。高剂量与低剂量的抑菌圈直径之差最好不小于2mm。 2.试验准备：双碟、钢管、毛细滴管、吸管的清洗及灭菌；容量瓶、定量吸管的清洗；培养基、缓冲液的准备、半无菌间的紫外消毒等。 3.双碟底层的制备：每只双碟加底层培养基约20ml，待培养基凝固，待用。 4.供试品、标准品溶液的制备：估计供试品的效价，根据试验要求设计供试品、标准品溶液稀释步骤，平行制备供试品、标准品相关剂量的溶液。 5.菌层的制备：每只双碟加入5ml菌层培养基。注意菌层培养基温度；根据预试验确定加入菌层培养基的菌液量，注意制备菌层的速度和平整度。 6.滴加抗生素溶液：在每个双碟的4个钢管中，对角的两个钢管分别滴加高浓度和低浓度的标准品溶液，其余两个对角位置的钢管分别滴加相应的高、低浓度的供试品溶液。 7.双碟的培养：根据培养温度的要求在培养箱中进行培养，培养箱中水平叠放的双碟数以不超过三层为宜。 8.抑菌圈的测量，结果的可靠性检验及效价测定。 * * * 以抗生素活性成分的重量计量抗生素的效价单位，已经得到了共识，目前新开发的各类抗生素，无论其以各类盐的形式存在，或以其前药各类酯的形式存在，抗生素的效价单位均采用活性成分的重量表示。 * * * 抗生素微生物检定法是国际上通用的、经典的抗生素效价测定方法。自20世纪40年代建立至今，在各国药典中被普遍采用。 * * * * 管碟法是目前抗生素效价测定的国际通用方法。 * 在摊布试验菌的琼脂培养基平板上，安置不锈钢小管，在小管内加入抗生素溶液后，在37℃条件下培养，琼脂培养基中便产生两种互动作用：一种是抗生素溶液向培养基内呈球面扩散作用，另一种为试验菌的生长作用。抗生素在琼脂培养基中的浓度，随离开小管距离的增大而降低，即离开小管越远，琼脂培养基中抗生素浓度越低。当培养到一定时间，琼脂培养基中的两种互动作用达到动态平衡时，琼脂培养基中便形成透明的抑菌圈。即：在抑菌圈中因抗生素浓度高于抑菌浓度，试验菌生长受到抑制，此处琼脂培养基成透明状；在抑菌圈边缘抗生素浓度恰好等于抗生素最低抑菌浓度。 * * * 公式中r为抑菌圈的半径；D为扩散系数；T为抗生素扩散时间；M为管中抗生素的量；C’为抗生素最低抑菌浓度。 * 公式以直线方程的形式出现：Y＝bX＋c。 * * * * * * * * * 2.检定原理 基本原理：细菌接种于澄清的营养丰富的液体培养基中，在一定的温度下培养一段时间，变浑浊，其浑浊程度与细菌数的增加、细菌群体质量的增加和细菌群体细胞容积的增大之间存在着直接的关系。当一定的光束照射其已经浑浊的液体培养基时，通过测定其透过率就知道细菌生长情况，在一定的抗生素浓度范围内，剂量响应为一直线。因此，在剂量响应曲线的直线范围内，可设计比浊法测定抗生素含