猪整合素β3多克隆抗体制备与鉴定.PDFVIP

　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　２０１６（０７上）：２５－２８，２７５－２７６ 猪整合素 ３多克隆抗体制备与鉴定 β 高　晶，王志慧，郭东华，李春秋，苏明俊，王欣宇，赵喜文， 王恩雨，魏　姗，刘秋瑾，孙东波 （黑龙江八一农垦大学 动物科技学院，黑龙江 大庆 １６３３１９） ＋ 中图分类号：Ｑ３４４．１３ 文献标识码：Ａ 文章编号：１００４－７０３４（２０１６）０７－００２５－０６ 关键词：猪；整合素 ３；原核表达；重组蛋白；多克隆抗体；病毒受体；病毒感染 β 摘　要：为了制备猪整合素 ３多克隆抗体，试验利用大肠杆菌原核表达系统，对密码子优化的猪整 β 合素 ３基因主要抗原区进行原核表达，表达的重组蛋白纯化后，免疫Ｂａｌｂ／ｃ雌性小鼠，采血后分离 β 血清，进一步通过ＥＬＩＳＡ和Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔ对制备的猪整合素 ３多克隆抗体进行鉴定。结果表明：猪 β 整合素 ３基因主要抗原区获得了成功表达，表达蛋白分子质量为１０２ｋｕ左右，以纯化重组蛋白作为 β 免疫原制备的多克隆抗体效价为１∶１２８００，且能识别天然猪整合素 ３。 β Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎａｎｄｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆｐｏｌｙｃｌｏｎａｌａｎｔｉｂｏｄｙａｇａｉｎｓｔｐｏｒｃｉｎｅｉｎｔｅｇｒｉｎ ３ β ＧＡＯＪｉｎｇ，ＷＡＮＧＺｈｉｈｕｉ，ＧＵＯＤｏｎｇｈｕａ，ＬＩＣｈｕｎｑｉｕ，ＳＵＭｉｎｇｊｕｎ，ＷＡＮＧＸｉｎｙｕ，ＺＨＡＯＸｉｗｅｎ， ＷＡＮＧＥｎｙｕ，ＷＥＩＳｈａｎ，ＬＩＵＱｉｕｊｉｎ，ＳＵＮＤｏｎｇｂｏ （ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＡｎｉｍａｌＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，ＨｅｉｌｏｎｇｊｉａｎｇＢａｙｉＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｄａｑｉｎｇ１６３３１９，Ｃｈｉｎａ） Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ｐｉｇ；ｉｎｔｅｇｒｉｎ ３；ｐｒｏｋａｒｙｏｔｉｃｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ；ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔｐｒｏｔｅｉｎ；ｐｏｌｙｃｌｏｎａｌａｎｔｉｂｏｄｙ；ｖｉｒｕｓｒｅｃｅｐｔｏｒ；ｖｉｒｕｓｉｎｆｅｃｔｉｏｎ β Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｏｐｒｅｐａｒｅｔｈｅｐｏｌｙｃｌｏｎａｌａｎｔｉｂｏｄｙａｇａｉｎｓｔｐｏｒｃｉｎｅｉｎｔｅｇｒｉｎ ３，ｔｈｅｐｒｏｋａｒｙｏｔｉｃｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｃｏｄｏｎ－ｏｐｔｉｍｉｚｅｄｍａｊｏｒａｎｔｉｇｅｎｒｅｇｉｏｎｏｆ β ｐｏｒｃｉｎｅｉｎｔｅｇｒｉｎ ３ｗａｓｃｏｎｄｕｃｔｅｄｕｓｉｎｇｐｒｏｋａｒｙｏｔｉｃｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｓｙｓｔｅｍｏｆＥｓｃｈｅｒｉｃｈｉａｃｏｌｉ．ＴｈｅＢａｌｂ／ｃｍｉｃｅｗｅｒｅｉｍｍｕｎｉｚｅｄｕｓｉｎｇｔｈｅｐｕｒｉｆｉｅｄ β ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔｐｏｒｃｉｎｅｉｎｔｅｇｒｉｎ ３ｐｒｏｔｅｉｎ，ａｎｄｔｈｅｎｂｌｏｏｄｓａｍｐｌｅｓｗｅｒｅｃｏｌｌｅｃｔｅｄｔｏｉｓｏｌａｔｅｓｅｒｕｍ．ＴｈｅＥＬＩＳＡａｎｄＷｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔｗｅｒｅｕｓｅｄｆｏｒ β ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆｔｈｅｐｒｅｐａｒｅｄｐｏｌｙｃｌｏｎａｌａｎｔｉｂｏｄｙａｇａｉｎｓｔｐｏｒｃｉｎｅｉｎｔｅｇｒｉｎ ３．Ｔｈｅｒｅｓｕｌｔｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｔｈｅｍａｊｏｒａｎｔｉｇｅｎｒｅｇｉｏｎｏｆｐｏｒｃｉｎｅｉｎｔｅ β