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粪肠球菌毒力因子gelE研究进展-农学论文 粪肠球菌毒力因子gelE研究进展 孟庆君，高原，吕娜 （内蒙古民族大学动物科学技术学院，内蒙古高校毒物与动物疾病监控重点实验室培育基地，内蒙古通辽028042） 摘要：粪肠球菌与多种感染相关，明胶酶是其主要毒力因子之一，它影响粪肠球菌毒力，与粪肠球菌生物被膜形成有关。现对gelE在生物被膜形成中的作用进行综述。 关键词 ：粪肠球菌；明胶酶；生物被膜 中图分类号：S85 文献标志码：A 论文编号：2014-0542 0 引言 肠球菌早已被确认为条件性致病菌，经常参与伤口感染、腹腔内脓肿以及泌尿道、胆道、根管感染，主要见于免疫力低下或过量使用抗生素的患者[1]，也可以导致败血症、心内膜炎等从而危及生命，死亡率达21.0%~27.5%[2]。在过去的几十年中，肠球菌已成为越来越严重的医院病原体，部分原因是它普遍的多重抗生素耐药性[3]。除了溶细胞素，其本身对广泛的原核和真核细胞是致命的，在粪肠球菌中已发现几个毒力相关因子，包括聚集物质(Agg)、肠球菌表面蛋白(Esp)以及2 个胞外蛋白酶：明胶酶(gelatinase，gelE)和丝氨酸蛋白酶(sprE)[4]。这些因子之间协同作用，促进细菌寄居、迁移和生物被膜的形成，从而增强其毒力。在特定条件下细菌能够形成生物被膜，从而增强对抗生素和宿主免疫系统的抵抗力，引起感染性疾病。生物被膜形成机制的研究发现密度感应系统(QS)的调控有重要作用，gelE基因作为肠球菌主要QS 系统之一的fsr系统调控的下游基因，其编码的蛋白(gelE)与粪肠球菌生物被膜形成的关系亦受到重视[5]。gelE和sprE编码在同一个操纵子上，gelE-sprE，其表达由fsr位点编码的密度感应系统进行调节[6]。文章对粪肠球菌主要毒力因子gelE，及其在生物膜形成过程中的作用进行综述。 1 细菌生物被膜 细菌生物被膜是指细菌黏附于接触表面，分泌多糖基质、纤维蛋白、脂蛋白等，将其自身包裹其中而形成的大量细菌聚集膜样物，主要由细菌、高水化的多阴离子基质及被俘获的体外的大分子组成。生物被膜是细菌的一种具有保护性的生长模式，具有结构和代谢复杂性。在特定的条件下，细菌可以形成生物被膜，包被有生物被膜的细菌称为被膜菌。被膜菌无论其形态结构、生理生化特性、致病性还是对环境因子的敏感性等都与浮游细菌有显著的不同，尤其对抗生素和宿主免疫系统具有很强的抵抗力，从而导致严重的临床问题，引起许多慢性和难治性感染疾病的反复发作。细菌生物被膜粘附在各种医疗器械及导管上极难清除，以至引发大量的医源性感染。 细菌生物被膜的致病特点包括病灶局部的炎症反应不很强烈，感染有相互转化的静止期和发作期；抗菌药物治疗起初可能有效，但以后治疗常常失败；致病菌主要是来自皮肤和周围环境中的致病菌如金黄色葡萄球菌，粪肠球菌等。 2 生物被膜形成 生物被膜的形成是一个复杂的动态过程，其形成过程可分为3 个阶段：初始粘附阶段、聚集阶段和生物被膜成熟阶段。其中初始粘附是生物被膜形成的第1阶段，细菌最终能否粘附于表面取决于细菌与粘附表面接触面积足够大和两接触面之间所产生的吸附力大于排斥力。细菌粘附主要是通过细菌表面特定的粘素蛋白识别宿主表面受体来完成，具有特异性和选择性。接触表面的蛋白、糖蛋白和糖脂可作为受体，选择性地吸附特定种类的细菌。细菌粘附可分为可逆粘附和不可逆粘附2 个阶段，在可逆附着阶段影响其附着作用力较弱，主要为范德华力、静电力、疏水作用等；在不可逆附着阶段，细胞通过它的运输器官和附属肢体如鞭毛、纤毛和胞外多聚糖纤维等来达到接触表面。细菌粘附于表面后即调整基因表达，在生长繁殖的同时分泌大量的胞外多聚糖(exopolysaccharide,EPS)，包裹、粘附细胞逐渐形成微生物群落。细菌外多聚基质包裹是生物被膜成熟阶段。表面固生细菌包裹与其自身分泌的多聚糖基质中，形成了高度有组织的结构，这种结构具有不均质性，且在其中分布有可供运送养料、酶、代谢产物和排出废物的通道。 3 明胶酶在生物被膜形成中的作用 3.1 明胶酶（gelE） 明胶酶基因gelE是粪肠球菌分泌的一种Zn 金属蛋白酶，是流行病学资料和动物模型研究中的1 个致病因素。位于肠球菌染色体上，是一个28 ku 或32 ku的细胞外锌肽链内切酶（第二金属内肽酶；微生物蛋白酶），长度约1530 个碱基[7]，分子量约为31500，最适pH大概为6~8，等电点为4.6。其上游是粪肠球菌调节器fsr基因和3 个启动子，在转录水平调控明胶酶基因的表达；下游是丝氨酸蛋白酶基因sprE，由855