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微生物检验方法验证 珠海国信达 重点议题 一、法规要求 二、验证目的 三、检验概述 四、总菌落数检查方法验证 五、控制菌检查方法验证 六、无菌检查方法验证 一、法规要求 第二百二十六条 试剂、试液、培养基和检定菌的管理应当至少符合以下要求： （一） 试剂和培养基应当从可靠的供应商处采购，必要时应当对供应商进行评估； （二） 应当有接收试剂、试液、培养基的记录，必要时，应当在试剂、试液、 培养基的容器上标注接收日期； （三）应当按照相关规定或使用说明配制、贮存和使用试剂、试液和培养基。 特殊情况下，在接收或使用前，还应当对试剂进行鉴别或其他检验； （四）试液和已配制的培养基应当标注配制批号、配制日期和配制人员姓名，并有配制（包括灭菌）记录。不稳定的试剂、试液和培养基应当标注有效期及特殊贮存条件。标准液、滴定液还应当标注最后一次标化的日期和校正因子，并有标化记录； 一、法规要求 第二百二十六条 （续） （五）配制的培养基应当进行适用性检查，并有相关记录。应当有培养基使用记录； （六）应当有检验所需的各种检定菌，并建立检定菌保存、传代、使用、销毁的操作规程和相应记录； （七） 检定菌应当有适当的标识，内容至少包括菌种名称、编号、代次、传代 日期、传代操作人； （八）检定菌应当按照规定的条件贮存，贮存的方式和时间不应当对检定菌的 生长特性有不利影响。 二、验证目的 为了使微生物学检验方法的结果准确可靠，需要对每个品种的具体检验方法进行验证。 三、验证概述 微生物学检验方法包括： 1.微生物限度检查 2.无菌检查 3.防腐剂抑菌效力测定 三、验证概述 微生物学检验的影响因素： 1.药品本身的抑菌性 2.药品中防腐剂的抑菌性 3.培养基的促菌生长能力 4.培养条件（温度、湿度及需氧或厌氧） 5.过滤系统的材质 三、验证概述 消除抑菌性的方法: 一、化学中和法 用化学中和剂中和抑菌剂，消除抑菌作用。 二、稀释法 降低抑菌剂的浓度以消除抑菌性。 三、薄膜过滤法 抑菌性产品通过滤膜时，微生物被截留在膜上，检品被过滤掉。 ——微生物检查法准确与否的核心是对抑菌性的有效消除 四、总菌落数检查方法验证 环境条件：C级下的局部A级的单向流空气区域 培养基种类： 细菌计数 营养琼脂培养基 霉菌和酵母菌计数 玫瑰红钠琼脂培养基 酵母菌计数 酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂培养基 四、总菌落数检查方法验证 培养基适用性检查 被检培养基 培养结果 试验菌 试验菌 被检培养基上的菌落平均数不得小于对照培养基上的菌落平均数的70% 菌落形态大小应与对照培养基上的菌落一致 四、总菌落数检查方法验证 方法验证——对细菌、霉菌及酵母菌计数方法的验证： ——进行3次独立的平行试验，分别计算各组回收率。 （1）试验组 平皿法计数 薄膜过滤法计数 四、总菌落数检查方法验证 （2）菌液组 直接接种试验菌 （3）供试品对照组 取规定量供试液，按菌落计数方法测定供试品本底菌数。 （4）稀释剂对照组 用相应的稀释剂代替供试品，加入试验菌。 （若供试液制备需要分散、乳化、中和、离心或薄膜过滤等特殊处理时，需增加稀释剂对照组。） 四、总菌落数检查方法验证 合格标准： 在3次独立的平行试验中，稀释剂对照组的菌数回收率（稀释剂对照组的平均菌落数占菌液组的平均菌落数的百分率）应均不低于70%。 试验组的菌数回收率均不低于70% 五、控制菌检查方法验证 环境条件：C级下的局部A级的单向流空气区域 培养基和培养基试验： 无菌性 促生长能力——在最短时间内观察到明显生长 抑制能力——在培养的最长时间内不能观察到微生物的生长 指示能力——在规定的时间内必须和以前检验过并已接受的培养基在外观和指示反应都具备可比性。 五、控制菌检查方法验证 方法验证： 按照各品种项下规定检查的控制菌选择验证菌株。 规定量供试液+10~100cfu试