成人社区获得性肺炎的病毒病原学及临床特征分析-呼吸内科专业论文.docxVIP

中文摘要 第一部分 常见呼吸道病毒快速细胞培养与鉴定体系的建立 背景：病毒的实验室检测方法有病毒分离培养、病毒核酸分子生物学检测、病 毒直接检查、血清学试验检测病毒特异性抗体等。在国外发达国家的临床实验室， 病毒检测技术均比较成熟，但国内病毒检测技术普及程度低，全国的大型综合医院 大多没有常规进行临床呼吸道病毒检测。少数开展病毒检测的医院，病毒检测手段 相对单一，较少应用病毒诊断的“金标准”—病毒分离，多数仅应用一至两种病毒 学检测方法，如免疫荧光（IF）检测呼吸道分泌物中的病毒抗原、分子生物学技术 检测病毒核酸或血清学试验检测病毒特异性 IgM 抗体等。建立多种病毒诊断方法， 包括病毒分离，对呼吸道病毒感染的监测和诊断具有重要的临床意义。 目的：改进细胞分离培养技术，联合直接 IF 检测，建立常见呼吸道病毒快速细 胞培养与鉴定体系，并验证该体系的检测敏感性、检测时间和检测通量。 方法：采集广东省中医院急诊科成人急性呼吸道感染（ARI）患者和深圳市儿童 医院儿童 ARI 患者的鼻/咽拭子标本，接种到狗肾细胞（MDCK）、恒河猴肾细胞 （LLC-MK2）、人鼻咽癌细胞（ HEp-2）三种细胞上，同时设置阴性对照。室温 3000rpm， 离心 60min 后补加等体积的细胞维持培养液，置 34℃、含 5%CO2 的饱和湿度培养箱中 培养。每周观察细胞病变（CPE）3～4 次，于标本接种后 36～48h 及第 5～7 天，各 吸取 50μl MDCK 及 LLC-MK2 培养上清做血凝试验（HAT）。CPE 和/或 HAT 阳性者，以 病毒特异性单克隆荧光抗体[甲型流感病毒(Flu A)、乙型流感病毒(Flu B)、呼吸道 合胞病毒(RSV)、腺病毒(ADV)、副流感病毒 1、2、3 型(PIV-1、2、3)]做 IF 鉴定。 所有标本接种后 7 天，对阴性细胞再做 IF 筛查，阴性者判为阴性，阳性者根据阳性 细胞类型选择对应的病毒特异性抗体做 IF 鉴定。将 ATCC 标准病毒株，分别接种到 对应宿主细胞上，3～7 天后刮取细胞作涂片固定后低温保存，在 IF 时作为阳性对照。 结果：①2009 年 1 月至 4 月期间，共检测拭子标本 641 份，病毒阳性 87 份，阳 性率 13.6%。检出病毒 88 株（1 份标本为 Flu A/B 双重感染），其中 Flu-A 20 株， Flu-B 39 株，PIV-1 2 株，PIV-2 1 株，PIV-3 15 株，ADV 8 株，RSV 2 株。②每块 96 孔板可接种 11 份标本，每批接种 4 块 96 孔板较为合适，即接种 44 份标本。③标 本接种后，出现阳性结果的平均时间分别为：Flu 2d、ADV 3d、PIV 3-4d，RSV 5d。 结论：本次实验建立了一个稳定的呼吸道病毒快速细胞培养与鉴定体系，敏感 性好，特异性佳，每批可检测 44 份标本，得到阳性结果的平均时间约为 2～5 天， 可应用于常见呼吸道病毒分离检测。 关键词：呼吸道病毒；病毒分离；免疫荧光；病原体；急性呼吸道感染 第二部分 成人社区获得性肺炎的病毒病原学及临床特征分析 背景：社区获得性肺炎(CAP)是威胁人类健康的最常见感染性疾病之一。在我国， 肺炎在所有死因中排第五位。然而，目前对 CAP 的病原学仍知之不足，大约有 17%-48% 的 CAP 患者病原学不明。20 世纪以来的几次全球流行性急性呼吸道病毒感染性疾病， 如 20 世纪的 4 次流感大流行、1997 年最先报道于香港的人感染高致病性禽流感、2003 年的严重急性呼吸综合征（SARS）等均严重威胁着人类的健康。2009 年爆发的全球 甲型 H1N1 流感大流行，截止至 2010 年 3 月 7 日，已导致全球死亡 16,713 例，其中 中国有 796 例，而未来的流行趋势尚不明朗。我国华南地区因特殊的地理位置、海 洋季风气候和农业生产方式，被 国际学术界普遍认为是“世界流感中心”。2003 年的 SARS 亦被认为起源于广东。而广州市是我国华南地区的中心大城市，与国际及内地 其他城市接触交流频繁。近年来流行病学调查显示病毒性肺炎的发病率高达 56%，病 毒已被公认为是 CAP 的重要病原学之一，但是 CAP 诊治指南并没有提供详细的有关 病毒性肺炎的评估和治疗建议。国内目前尚缺乏成人病毒性 CAP 病原及临床特征的 详细资料。 目的：检测成人 CAP 的病毒病原学，分析临床特征。 方法：收集 2009 年 4 月至 2009 年 12 月期间，就诊于广州医学院第一附属医院 的 CAP 患者的鼻/咽拭子、急性期与恢复期（2-4 周后）血清，记录病史资料。应用 常见呼吸道病毒快速细胞培养与鉴定体系、逆转录聚合酶链