2018-2019高中生物 第4章 现代生物技术 4.3 聚合酶链式反应技术课件 北师大版选修1.pptVIP

2.PCR的常见问题 PCR实验很容易出现假阳性(检测出非目的片段的扩增,而未检测出目的片段的扩增)或假阴性(未检测出任何片段的扩增)的结果。 PCR技术高度灵敏,极其微量的靶基因污染都会造成非目标DNA片段的大量扩增,因此模板DNA的污染是PCR出现假阳性结果的主要原因。此外,样品中存在靶基因的类似序列也可能造成假阳性结果。为了避免因污染而造成的假阳性结果,PCR操作时要注意做到隔离操作区,分装试剂,简化操作程序,使用一次性吸头等。 出现假阴性结果的常见原因有Taq DNA聚合酶活力不够或其活性受到抑制;引物设计不合理;提取的模板质量或数量不过关、PCR系统的建立欠妥当及循环次数不够,等等。当实验中出现假阴性的情况时,应首先在原来扩增的产物中再加入Taq DNA聚合酶,并增加5~10次循环。为了防止假阴性结果的出现,在选用Taq DNA聚合酶时,要注意用活力高、质量好的酶。尽管Taq DNA聚合酶对模板纯度的要求不高,但也不允许有机试剂的污染。所以,在提取DNA模板时,应特别注意避免提取物中含有抑制酶活性的污染物。PCR扩增的先决条件以及特异性的高低,很大程度上取决于引物与靶DNA的互补情况,尤其需要保证引物的3端与靶基因互补。 PCR的原理及应用 【例题1】 下列有关PCR的描述,不正确的是(　　) A.是体外酶促合成特定DNA片段的一种技术 B.引物一般采用人工合成的单链DN