三单克隆抗体的制备.PPTVIP

实验三：单克隆抗体的制备 实验目的和要求 了解单克隆抗体的特性和优缺点； 学会在实验室制备针对某种抗原表位的单克隆抗体。 单克隆抗体的制备原理 单克隆抗体（monoclonal antibody, McAb）是指由一个B细胞分化增殖的子代细胞（浆细胞）产生的针对单一抗原决定簇的抗体。 1975年Khler和Milstein首次建立了体外淋巴细胞杂交瘤技术，即单克隆抗体技术，而获得1984年诺贝尔医学和生理学奖。 单克隆抗体技术：用人工方法将产生特异性抗体的B细胞与骨髓瘤细胞融合，形成B细胞杂交瘤，这种杂交瘤既有骨髓瘤细胞无限繁殖的特性，又有B细胞分泌特异性抗体的能力，将这种克隆化的杂交瘤细胞进行培养或注入小鼠体内可获得大量高效价、单一的特异性抗体，即McAb HAT选择性培养基：培养基中加次黄嘌呤HyPoxanthine (H)，氨基蝶呤Aminoopterin (A)，胸腺嘧啶核苷Thymidine (T) ]； 酶：次黄嘌呤磷酸核糖转移酶或胸腺嘧啶核苷激酶，利用次黄嘌呤或胸腺嘧啶核苷合成NDA 氨基蝶呤：阻断谷酰胺与鸟核苷酸单磷酸合成DNA 结果：未融合的瘤细胞不能合成DNA，必然死亡。 B淋巴细胞在一般培养基中不能长期生长，一般于2周内死亡。 融合的杂交瘤细胞由于淋巴细胞具有次黄嘌呤磷酸核糖转化酶，可以通过次黄嘌呤合成DNA，克服氨基蝶呤的阻断，