DNA重组技术与基操作 (2).ppt

第三章 动物基因工程基础 限制性内切酶 克隆载体 重组基因的导入和筛选 获得真核生物目的基因的方法 基因工程研究的理论依据 不同基因具有相同的物质基础 基因是可以切割的 基因是可以转移的 多肽与基因之间存在对应关系 遗传密码是通用的 基因可以通过复制把遗传信息传递给下一代 第一节限制性内切酶 DNA限制性内切酶可分为三类： Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ Ⅰ、Ⅲ酶在基因工程中基本不用,why? Ⅰ、Ⅲ限制性内切酶在同一蛋白分子中兼有甲基化作用及依赖于ATP的限制性内切酶活性。 Ⅰ类酶结合于特定的识别位点，但却没有特定的切割位点，酶对其识别位点进行随机切割，很难形成稳定的、特异性切割末端。 Ⅲ类酶在识别位点上切割DNA，然后从底物上解离下来。 一、II类限制性内切酶的特点 识别特定的核苷酸序列，其长度一般为4、5或6个核苷酸且呈二重对称，但有少数酶识别更长的序列或兼并序列； 具有特定的酶切位点 ，产生出特定的酶切末端→5’突出粘末端、3’突出粘末端、平末端； Ⅱ类限制－修饰系统是由两种酶分子组成的二元系统；限制性内切酶、独立的甲基化酶。 二、使用限制性内切酶时应注意的问题 1、仔细查阅酶的识别序列和切割位点。 同裂酶：不同来源但是识别同样顺序和相同切割位点的限制性内切酶。 同尾酶：有时有两种限制性内切酶识别不同的核苷酸序列，但切割后DNA分子所产生的粘性末端却相同，