台东苏铁中RNA不同提取方法的比较.PDFVIP

2017年第52卷第3期 生物学通报 51 台东苏铁中RNA不同提取方法的比较 沈成才 (北京师范大学克拉玛依附属学校 新疆克拉玛依834000) 摘要 苏铁作为古老的裸子植物，对种子植物的起源与演化、遗传多样性与亲缘关系等研 究具有重要意义。由于苏铁中含有大量多糖、多酚等次级代谢产物，会以不同形式干扰RNA 的提取，而高质量的RNA对分子生物学等研究至关重要。因此，通过异硫氰酸胍法、CTBA法 和试剂盒法分别提取台东苏铁的RNA，最终采用改良的异硫氰酸胍法提取台东苏铁总RNA 方法效果较好，获得的RNA条带边缘清晰，而且28SRNA条带是18SRNA条带亮度的2倍， A260／A280比值在2．0左右。 关键词 台东苏铁RNA提取异硫氰酸胍法 中国图书分类号：Q522文献标识码：B revolute 1 材料与方法 苏铁(Cycas Thunb)，苏铁科苏铁属， 又名凤尾蕉、金代、铁树等，苏铁科植物是世界上 1．1 材料 最古老的裸子植物，被誉为“植物的活化石”[1]。苏 1．1．1 实验材料 台东苏铁(Cycas 铁对研究种子植物的起源与演化、种子植物的区 购买于西安三森市场。 系和古气候的变迁、基因表达与调控、遗传多样性 1。1．2实验试剂 和亲缘关系等都有重要意义E2]。苏铁RNA的提取 对生物学特性和分子生物学的研究至关重要，较 十二烷基肌氨酸钠，异硫氰酸胍，柠檬酸钠，水饱 高质量的RNA可为Northern杂交、cDNA文库建和酚酸，亚精胺，植物RNA提取试剂盒，无水乙 构、RT-PCR及RNA编辑位点的研究等提供保证。醇，液氮，氯仿，异戊醇，异丙醇。 mm01]L 现阶段植物总RNA的提取技术已经比较成 GT溶液(4mol／L异硫氰酸胍，25 熟，有多种方法可供选择，例如胍盐法、SDS法、 柠檬酸钠，0．5％十二烷基肌氨酸钠)；RNA提 mmol／L CTAB法、苯酚法、LiCl沉淀法、异硫氰酸胍法，商取液(20g／LCTAB，20g，LPVP，50 EDTA， 4．0mol／L 品化试剂盒法等[32。RNA的提取方法很多，但这 NaCl)；10×TBE电泳缓冲液(108Tris； g 55 000 些方法在RNA提取材料上都具有一定针对性，适 g硼酸；9．3gEDTA一2Na；1mL；pH8．0)；1％ 用范围有限，尤其是裸子植物的RNA提取相对较 琼脂糖凝胶(0．2g琼脂糖；1xTBE缓冲液20mL； mol／L mol／LNaAc 难。由于苏铁中大量的多糖、多酚等次级代谢产物 2斗LEB)；3 5．8)，2 NaAc(pH mol／L 在细胞破碎后会以不同方式干扰RNA的提取，例 4．8)，4 (pH 如：酚类物质氧化后可使RNA活性丧失，多糖可 植物总RNA提取试剂盒