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实验四线粒体和液泡系超染色与观察
实验三：线粒体和液泡系的超活染色与观察 【课前预习】 1．什么是液泡系？ 2．为什么不能用一种活体染料同时观察多种细胞器？ 【目的要求】 1. 观察动植物活细胞内线粒体、液泡系的形态、发育和分布 2. 了解细胞和细胞器的超活染色技术 【基本原理】 线粒体是细胞内一种重要细胞器，细胞的各项活动所需要的能量，主要是通过线粒体呼吸作用来提供的。活体染色是应用无毒或毒性较小的染色剂真实地显示活细胞内某些结构而又很少影响细胞生命活动的一种染色方法。詹纳斯绿 B（Janus green B）是线垃体的专一性活细胞染色剂，毒性很小，属于碱性染料，解离后带正电，由电性吸引堆积在线粒体膜上。线粒体中细胞色素氧化酶使染料保持氧化状态呈蓝绿色，从而使线粒体显色，而在周围的细胞质中染料被还原，成为无色状态。细胞中的线粒体呈蓝绿色的颗粒。 中性红对液泡系的染色具有专一性，将活细胞中的液泡系染成红色。 【实验用品】 1. 器材：显微镜、恒温水浴锅、、剪刀、镊子、解剖刀、载玻片、盖玻片、吸管、牙签、吸水纸 2. 试剂：Ringer液、1/5000詹纳斯绿B、1/3000中性红 3. 材料：人口腔上皮细胞、洋葱鳞茎内表皮细胞、小麦（或绿豆）幼根根尖 【方法步骤】 1．线粒体的超活染色与观察 1）口腔上皮细胞线粒体的超活染色：1/5000詹纳斯绿B1-2滴，口腔上皮细胞（牙签刮取），载玻片于37℃恒温染色10-15min，显微镜下观察。 2）洋葱鳞茎内表皮细胞线粒体的超活染色与观察：1/5000詹纳斯绿B溶液1-2滴，洋葱鳞茎内表皮，载玻片于37℃恒温水浴染色10-15min，显微镜下观察。 2．小麦（或绿豆）幼根根尖液泡系的中性红染色观察 小麦（或绿豆）幼苗根尖（1-2cm）纵切面切片，1/3000中性红溶液1滴染色5-10min，载玻片于37℃恒温水浴，盖上盖玻片压扁根尖，显微镜下观察。 【方法步骤】 1．线粒体的超活染色与观察 1）口腔上皮细胞线粒体的超活染色：1/5000詹纳斯绿B1-2滴，口腔上皮细胞（牙签刮取），载玻片于37℃恒温染色10-15min，显微镜下观察。 2）洋葱鳞茎内表皮细胞线粒体的超活染色与观察：1/5000詹纳斯绿B溶液1-2滴，洋葱鳞茎内表皮，载玻片于37℃恒温水浴染色10-15min，显微镜下观察。 2．小麦（或绿豆）幼根根尖液泡系的中性红染色观察 小麦（或绿豆）幼苗根尖（1-2cm）纵切面切片，1/3000中性红溶液1滴染色5-10min，载玻片于37℃恒温水浴，盖上盖玻片压扁根尖，显微镜下观察。 【实验结果】 【实验报告】 1．绘出人口腔上皮细胞示线粒体的形态与分布并简要分析。 2．绘出小麦幼根根尖组织液泡系的形态与分布并简要分析 * * 口腔上皮细胞的线粒体分布 洋葱内表皮细胞线粒体分布 植物根尖液泡的中性红染色 *
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