免疫组化常见问题解析.docxVIP

[在此处键入] 免疫组化常见问题解析 免疫组化常见问题解析 1、出现非特异性背景染色怎么办？ (1)冲洗不充分 ? ???解决：每步冲洗3×5(2)组织中含过氧化物酶未阻断 ?? 解决：可再配置新鲜3%H2O2封闭，孵育时间延长(3)组织中含内源性生物素?? ??解决：正常非免疫 动物血清再封闭(4)血清蛋白封闭不充分??? ??解决：延长血清蛋白封闭时间 2、脱片产生的原因有哪些？ （1）组织切的不好，切的不均匀。（2）时间短，温度不够。（3）操作不规范，有脱片嫌疑的片子最好不甩或轻轻甩，用卫生纸从边缘上慢慢吸水。（4）抗原修复的时候高压时间过长了。此外，用EDTA修复比柠檬酸容易脱片。（5）使用PBS的时候尽量用泡的，不要冲。 3、染色阴性怎么办？ （1）操作步骤错误，重新试验，设立阳性对照（2）组织中无抗原，设立阳性对照片，以验证实验结果（3）一抗与二抗种属连接错误，仔细确定一抗与二抗种属无误 4、苏木素复染后氨水返蓝怎么做? 返蓝可以用碱性溶液（PBS/Na2HPO4/淡氨水）或45度温水. 冷水蓝化均可。一般蓝化5~10 min。 5、如何做到充分脱蜡？ （1）目前用于脱蜡的试剂主要是二甲苯，脱蜡力强，脱蜡时间较短； （2）脱蜡的时间要根据季节，室温和试剂来调整。如果在夏天气温较高，脱蜡试剂也新鲜，则脱蜡时间不需很多，3-5min就已足够。如果在冬天，