基工程的原理和技术.pptVIP

* * 第二节 基因工程的原理和技术 温故而知新 限制性核酸内切酶 DNA连接酶 质粒——载体 基因工程操作的工具 剪切 拼接 导入 表达 （一）获得目的基因 （二）形成重组DNA分子 （三）将重组DNA分子导入受体细胞 （四）目的基因的检测和表达 基因工程的原理和技术 1、筛选含有目的基因的受体细胞 2、目的基因的表达 步骤一 获得目的基因 人工合成(反转录法) 利用PCR技术扩增 已知序列： 从基因文库获得 未知序列： ( DNA library ) 聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction) 氢键断裂，形成单链DNA。 引物与DNA模板结合，形成局部双链。 在酶的作用下，不断延伸，合成双链DNA。 多次循环，获得大量双链DNA分子。 PCR技术扩增 利用PCR技术扩增目的基因 目的基因的mRNA 逆转录 单链DNA 合成 双链DNA（目的基因） 蛋白质氨基酸序列 推测 mRNA的核苷酸序列 推测 结构基因的核苷酸序列 化学合成 目的基因 人工合成法 逆转录法 根据已知氨基酸序列直接合成DNA 鸟枪法：散弹射击法 供体细胞DNA 限制酶 许多DNA片段 载入 运载体 导入 受体细胞 扩增 产生特定性状 分离 目的基因 从基因文库获得 步骤二 形成重组DNA分子 可能存在情况：目的基因 载体 步骤三 将重组DNA分子导入受体细胞 1、将目的基因导入