Waters高效液相谱维护与保养.pptVIP

Waters液相色谱维护保养 以下课件是我在使用、操作、高效液相色谱仪十年中积累的经验，以及集合外部学习的经验所写，如有讲的不好、错误之处，请大家及时指出，我们共同学习！ 质检： Waters高效液相色谱常见故障与解析 第一部分常用术语 第二部简述HPLC的组成 第三部分主要讲液相常见故障与解析| 第四部分简谈示差检测的原理 第五部分：色谱柱的维护与保养 第一部分术语 术语 6、基线噪声:没有溶质通过检测器时，检测器输出信号的随机扰动变化。（就是没有打进样品而直接查看基线时所产生的杂峰） 7、基线漂移：基线随时间的增加朝单一方向的偏离称为漂移。反映的是信号连续的递增和递减。产生原因：电源电压不稳、色谱系统未达到平衡、固定相流失、流动相的变化、温度和流量的波动 术语 8、色谱峰：色谱柱流出组分通过检测器时产生的响应信号的微分曲线。 9、峰底：峰的起点与终点间的直线 10、峰高：在峰的两侧拐点处所作切线与峰底相交两点之间的距离。11、半峰宽（W1/2）：通过峰高的中点做平行与峰底的直线，与其峰两侧相交两点间的距离。12、峰面积（A）：峰与峰底间的面积，又称作响应值。 13、拖尾峰：后沿较前沿平缓的不对称峰。 14、前伸峰：前沿较后沿平缓的不对称峰 术语 15、死时间（t0）:不被固定相滞留的组分，从进样到出峰最大之所需的时间 16、保留时间（tR）：组分从进样到出峰最大之所需的时间。 17、死体积（V0）：不被固定相滞留的组分，从进样到出峰最大之所需的流动相的体积 18、柱外体积?：从进样系统到检测器之间色谱柱以外的液路部分中流动相所占有的体积。 19、淋洗体积?：从进样开始计算的通过色谱柱的实际淋洗体积 术语 20、反相色谱柱 ???反相色谱填料常是以硅胶为基础，表面键合有极性相对较弱的官能团的键合相。反相色谱所使用的流动相极性较强，通常为水，缓冲液与甲醇，已腈等混合物。样品流出色谱柱的顺序是极性较强组合最先被冲出，而极性弱的组份会在色谱柱上有更强的保留。常用的反相填料有C18（ODS）、C8（MOS）、C4（B） 术语 21、排阻色谱又称凝胶色谱或凝胶渗透色谱，是利用被分离物质分子量大小的不同和在填料上渗透程度的不同，以使组分分离。它类似于分子筛的作用，按分子大小进行分离。试样进入色谱柱后，随流动相在凝胶外部间隙以及孔穴旁流过。在试样中一些太大的分子不能进入胶孔而受到排阻，因此就直接通过柱子，首先在色谱图上出现，一些很小的分子可以进入所有胶孔并渗透到颗粒中，这些组分在柱上的保留值最大，在色谱图上最后出现。例如：我们常用的 ks-802色谱柱 第一部分术语 22、面积归一法：将所有峰的面积总和定为1，测量各峰的面积和色谱图上除溶剂峰以外的总色谱峰面积，计算各峰面积占总峰面积的百分率。是包含水分在内的一个计算结果。 第一大部分术语 23 .面积外标法：外表法就是用标准品的峰面积或峰高与其对应的浓度做一条标准曲线,测出样品的峰面积或峰高,在标准曲线上查出其对应的浓度,这是最常用的一种定量方法 通过进标样建立一个校正曲线（一般是6针标样）。校正曲线的横坐标是标样的浓度（含量），纵坐标是峰面积；校正曲线就相当于：Y=aX+b的公式。校正曲线建立好后样品的峰面积带入方程就可以得到相应的浓度（含量）。 Waters515泵 Waters2414示差检测器 N2000色谱工作站 数据处理系统 2414示差检测器原理 示差检测器是基于连续测定样品流路和参比流路之间折射率的变化来测定样品含量的。光从一种介质进入另一种介质时，由于两种物质的折射率不同就会产生折射。只要样品组分与流动相的折光指数不同，就可被检测，二者相差愈大，灵敏度愈高，在一定浓度范围内检测器的输出与溶质浓度成正比 示差折光检测器原理 检测器的光路是由光源、凸镜、检测池、反射镜、平板玻璃、双光敏电阻等主要部件组成，检测池有参比，测量两个池室，它们对光路来说是串联的。 示差检测器原理 第四部分色谱柱的维护与保养 1、钙柱：此色谱柱由钙基树脂填装而成，氢离子或其它离子会取代钙离子，或是引起与柱中糖的转换，尤其是像蔗糖这样易于转换的糖，因此推荐在流动相中加入一定量的钙离子不保持平衡和防止与样品的转换。要保持装流动相的瓶子干净，有盖子，且新鲜，流动相需要每24小时重新配制。 新的钙柱使用注意事项 2新色谱柱的使用：为了保证新柱子能在分析使用之前得到足够的钙离子的平衡 1）将柱子按照通常使用的反方向安装（标签上的箭头指向柱子的入端口）； 2）用至少100ml的0.001M EDTA钙盐溶液在90℃ 用0.5ml/min流速反冲柱子，500mg/L的钙盐的浓度大约为0.001M； 3）将柱子反过来（回到通常的流动方向）用分析所用流动相冲柱子，（用与上一上步骤同样的条件