慢病毒靶向干扰Cx26抑制人高转移性.PDFVIP

中国药理学通报　ＣｈｉｎｅｓｅＰｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌＢｕｌｌｅｔｉｎ　２０１４Ｊｕｌ；３０（７）：９３７～４１ ·９３７· 网络出版时间：２０１４－６－２４１６：３５　网络出版地址：ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｃｎｋｉ．ｎｅｔ／ｋｃｍｓ／ｄｏｉ／１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００１－１９７８．２０１４．０７．０１２．ｈｔｍｌ 慢病毒靶向干扰 Ｃｘ２６抑制人高转移性 肝癌 ＨＣＣＬＭ３细胞增殖及迁移 １ １ ２ 阳　洁 ，覃贵慧 ，陈军泽 （广西医科大学１．药学院药理学教研室、２．第一临床医学院，广西 南宁　５３００２１） ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００１－１９７８．２０１４．０７．０１２ ［１］ 有效的ＧＪＩＣ 。但近年来国内外研究发现，在肝细 文献标志码：Ａ 文章编号：１００１－１９７８（２０１４）０７－０９３７－０５ 胞癌（简称肝癌），Ｃｘ３２主要异位表达在肝癌细胞胞 中国图书分类号：Ｒ３４１；Ｒ３２９．２４；Ｒ３２９．２５；Ｒ７３－３７； ［２］ 质、不形成有效的ＧＪＩＣ，但能促进肝癌进展 ，而 Ｒ７３５７０２．２；Ｒ９７７．６ Ｃｘ２６表达减少或缺失并伴 ＧＪＩＣ消失。此外，Ｙａｎｏ 摘要：目的　探讨缝隙连接蛋白２６（ｃｏｎｎｅｘｉｎ２６，Ｃｘ２６）对 ［３］ 等 还发现，肝癌 ＨｅｐＧ２细胞恶性表型的减少与 人高转移性肝癌 ＨＣＣＬＭ３细胞增殖、凋亡、迁移能力的影 Ｃｘ２６有关，而非 Ｃｘ３２。因此，为证实 Ｃｘ２６与肝癌 响。方法　构建Ｃｘ２６干扰慢病毒载体感染 ＨＣＣＬＭ３细胞， 恶性表型的相关性，本研究拟用慢病毒靶向干扰 用嘌呤霉素筛选稳定干扰 Ｃｘ２６表达的靶细胞，通过 Ｒｅａｌ Ｃｘ２６表达后，观察人高转移性肝癌ＨＣＣＬＭ３细胞体 ｔｉｍｅＰＣＲ和Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ鉴定 Ｃｘ２６的ｍＲＮＡ和蛋白表达情 况；用“ｐａｒａｃｈｕｔｅ”荧光示踪法检测细胞缝隙连接（ｇａｐｊｕｎｃ 外生物学特性的改变，以进一步阐明Ｃｘ２６在肝癌发 ｔｉｏｎ，ＧＪ）功能；用 ＭＴＴ法、流式细胞术、Ｔｒａｎｓｗｅｌｌ迁移实验 生、发展中的作用。 分别检测干扰 Ｃｘ２６对 ＨＣＣＬＭ３细胞增殖、凋亡、迁移能力 １　材料与方法 的影响。结果　ＬＶＣｘ２６组的Ｃｘ２６ｍＲＮＡ和蛋白表达明显 １．１　材料　人高转移性肝癌ＨＣＣＬＭ３细胞购自美 低于ＬＶＮＣ组和野生组细胞（Ｐ＜００１），并且ＬＶＣｘ２６组的 国ＡＴＣＣ，本实验室保存；ＤＭＥＭ高糖培养基、胎牛 ＧＪ功能也较ＬＶＮＣ组和野生组明显减弱（Ｐ＜００１）。干扰 血清、胰酶购自美国Ｇｉｂｃｏ公司；青霉素、链霉素、 Ｃｘ２６可明显抑制 ＨＣＣＬＭ３细胞增殖（Ｐ＜００１），促进 ＨＣ ＭＴＴ购自美国Ｓｉｇｍａ公司；ｈＵ６ＭＣＳＵｂｉｑｕｉｔｉｎＥＧ ＣＬＭ３细胞凋亡（Ｐ＜００１），降低其体外迁移能力（Ｐ＜ ＦＰＩＲＥＳｐｕｒｏｍｙｃｉｎＣｘ２６干扰慢病毒载体购自上海 ００１）。结论　慢病毒靶向干扰Ｃｘ２６表达可明显减弱其 ＧＪ Ｇｅｎｅｃｈｅｍ公司；ＴＲＩｚｏｌ购自美国 Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ公司； 功能，并抑制高转移性肝癌 ＨＣＣＬＭ３细胞增殖、迁移能力， ＰｒｉｍｅＳｃｒｉｐｔＲＴｒｅａｇｅｎｔＫｉｔ、Ｓ