细菌内毒素检查法-医疗器械.pdfVIP

细菌内毒素检查法 ——鲎试剂法 实验实训中心实验实训中心 朱庆玲 实验目的 • 了解细菌内毒素试验检测原理 • 掌握细菌内毒素试验的方法和要求 试剂 • 细菌内毒素国家标准品 • 鲎试剂 ，灵敏 0.25EU/ml （λ） • 细菌内毒素检查用水 • 输液、输血、注射器每件限量不超20EU （L ） 细菌内毒素与热原的关系 热原是指能使哺乳类动物产生热原反应的物质。 内毒素是主要的热原物质。 细菌内毒素是革兰氏阴性菌细胞壁的构成成分 ，具有多种生 物活性 ，它的化学结构是脂多糖 (LPS)。 原理 • 采用凝胶法检查细菌内毒素。用鲎试剂与细菌内 毒素产生凝结反应的机理 ，以判断供试品中细菌 内毒素的限量是否符合规定。 内毒素 （旁路反应） 二价阳离子 1,3－β-D-葡聚 C因子 活化的C因子 活化的G因子 G因子 B因子 活化的B因子 凝固酶原 凝固酶 凝固蛋白 （凝胶） 凝固蛋白原 鲎试剂成分 ： 含有C、B因子、凝固酶原、凝固蛋白原、二价钙/镁离子 ， 此外普通鲎试剂还含有G因子。 鲎试剂灵敏 ： 用符号用符号λλ表示表示 ，，其单位用其单位用 （（EU/mlEU/ml ））表示表示。。 检测标准检测标准 • GB/T 14233.2-2005 《医用输液、输血、注 射器具检验方法 第二部分 ：生物试验方法》 中 “4.细菌内毒素试验”。 •• 《《中华人民共和国药典中华人民共和国药典》版二部附录年版二部附录 XI E“细菌内毒素检查法”。 实验材料与仪器 试剂 ： 鲎试剂、细菌内毒素工作标准品 （WSE ）、细菌内毒素检 查用水 （BET水 ）。 用具 ： 加样器加样器、、吸头吸头、、烧杯烧杯、、玻璃试管玻璃试管、、试管架试管架、、封口膜封口膜、、砂轮砂轮 等。 仪器 ： 电热干燥箱、恒温水浴箱等。 实验前的准备 器具去内毒素处理 ： 玻璃器皿、直镊、剪刀等 置电热干燥箱中经180℃干烤至少 2 或250℃干烤至少30min ； 塑料器皿置30%双氧水中浸泡4 ，再用细菌内毒素检查用水 充分冲洗后置60 ℃烘干 ； 去除内毒素后未开启的密封容器内的用具去除内毒素后未开启的密封容器内的用具 ，，可供一周内使用可供一周内使用。。 或使用标明无内毒素并且对试验无干扰的器械 实验前处理 • 浸提体积计算 ：V=L/ λ V 浸提介质的体积 ； L产品内毒素的限值 ，单位为EU/件 ；λ所用鲎试剂灵敏 度标示值 ，单位为EU/ml。 • 制备浸提液的浸提条件 ： （（1））管类和容器类器具用细菌内毒素检查用水浸泡器具内腔管类和容器类器具用细菌内毒素检查用水浸泡器具内腔 ，， （37±1）℃，不少于1h。 （2）小型配件或实体性容器置无热原玻璃器皿中 ，加入细菌 内毒素检查用水振摇数次 ，在37±1℃恒温箱中浸提不少于1h 。 实验前处理 • 浸提液即为供试品内毒素检查用的供试液 ，浸提液储存应 不超过2h。 • 根据被检物需要的浸提体积 ，再确定需要使用鲎试剂的灵 敏敏 鲎试剂灵敏度复核 灵敏度 ：在本检查法规定的条件下 ，使用鲎试 剂产生凝集的内毒素最低浓度即为鲎试剂的 灵敏度 ，用EU/ml 表示。 灵敏度复核灵敏度复核 ：：确定鲎试剂灵敏度的准确性确定鲎试剂灵敏度的准确性 ，，以以 保证检验结果的可靠性及准确性。因此要求 每个试验室在将一批新