GB/T 13086-1991饲料中游离棉酚的测定方法.pdf

中华人 民共和 国国家标准 饲料中游离棉酚的测定方法 GB13086一91 Methodfordeterminationoffreegossypol infeeds 本标准参照采用国际标准ISO6866-1985《动物饲料中游离的和总棉酚的测定方法》。 主腼内容与适用范围 本标准规定了饲料中游离棉酚的测定方法。 本标准适用于棉籽粉、棉籽饼(粕)和含有这些物质的配合饲料(包括混合饲料)中游离棉酚的测定。 原理 在3-氨基一1一丙醇存在下用异丙醉与正己烷的混合溶剂提取游离棉酚，用苯胺使棉酚转化为苯胺棉 酚，在最大吸收波长440nm处进行比色测定。 试荆和溶液 除特殊规定外，本标准所用试剂均为分析纯，水为蒸馏水或相应纯度的水。 3 . ， . 异丙醇C(CH3)2CHOH,HG3-1167), 3 . n 了 正己烷。 3 q ︺ 冰乙酸(GB676), 3 . 月 ﹃ 苯胺(CsH,NH,GB691):如果测定的空白试验吸收值超过。.022时，在苯胺中加入锌粉进行蒸 馏 ， 弃去开始和最后的10%蒸馏部分，放入棕色的玻璃瓶内贮存在((0-v40C)冰箱中，该试剂可稳定几个 月 。 3 ‘ ︺ 3-氨基一1一丙醇(H2NCH,CH2CH2OH), 3 . 八 划 ﹄ 异丙醉一正己烷混合溶剂:6:4(V/V), 3 . ， 了 溶剂A;量取约500mL异丙醉、正己烷混合溶剂((3.6),2mL3-氨基一1一丙醇(3.5),8mL冰乙酸 3 ( 3)和50mL水于1000mL的容量瓶中，再用异丙醇一正己烷混合溶剂((3-6)定容至刻度。 4 仪器、设备 4 1 分光光度计:有10mm比色池，可在440nm处测量吸光度。 4 2 振荡器:振荡频率120^130次/min往复)。 4 3 . 恒温水浴。 4 4 具塞三角烧瓶:100,250mL, 4 5 容量瓶:25mL(棕色)。 4 6 吸量管:1,3,10mL, 4 7 移液管:10,50mL. 4 8 漏斗:直径50mm. 国家技术监督局1991一07门6批准 1992一04一01实施 GB13086一91 4.9 表玻璃:直径60mm, 5 试样制备 采集具有代表性的棉籽饼样品，至少2kg，四分法缩分至约250g，磨碎，过2.8mm孔筛，混匀，装人 密闭容器，防止试样变质，低温保存备用。 6 测定步骤 6.1 称取1-2g试样(精确到。.001g)>置于250ml具塞三角烧瓶((4-4)中，加入20粒玻璃珠，用移液 管((4-7)准确加入50mL溶剂A(3.7)，塞紧瓶塞，放入振荡器((4-2)内振荡1h(每分钟120次左右)。用干 燥的定墩滤纸过滤，过滤时在漏斗((4.8)上加盖一表玻璃(4-9)以减少溶剂挥发，弃去最初几滴滤液，收 集滤液于100mL具塞三角烧瓶(4.4)中。 6.2 用吸量管((4.6)吸取等量双份滤液5-10mL(每份约含50^100yg的棉酚)分别至两个25mL棕 色容量瓶((4-5)a和b中，如果需要，用溶剂A(3.7)补充至10mLo 6.3用异丙醇一正己烷混合溶剂((3-6)稀释瓶a至刻度，摇匀，该溶液用作试样测定液的参比溶液。 6.4 用移液管(4-7)吸取2份10mL的溶剂A(3.7)分别至两个25mL棕色容量瓶(4.5)ao和b。中。 6.5 用异丙醇一正己烷混合溶剂((3-6)补充瓶a。至刻度，摇匀，该溶液用作空白测定液的参比溶液。 6.6 加2.0mL苯胺(3-4)于容量瓶b和6。中，在沸水浴(4.3)上加热30min显色。 6.7 冷却至室温，用异丙醇一正己烷混合溶剂(3-6)定容，摇匀并静置1h, 6.8 用10mm比色池，在波长440nm处，用分光光度计((4-1)以a。为参比溶液测定空白测定液b。的吸 光度，以a为参比溶液测定试样测定液b的吸光度，从试样测定液的吸光度值中减去空白测定液的吸光 度值，得到校正吸光度A。 了 测定结果 7飞 计算公式 AX 1250X 1000 A X 1.25