CRISPRCas9介导hFAD3基因在牛NCAPGLCOR位点定点整合研究.docxVIP

优秀毕业论文 精品参考文献资料 CR CR I SPR／Cas9介导hFAD3基因 在牛NCAPG-LCORL位点定点整合研究 摘要 本研究利用CRISPR／Cas9介导，将无抗性无标记基因的hFAD3基因表达盒 定点敲入牛NCAPG—LCORL位点，研究hFAD3基因的表达对脂肪酸含量，位 点旁侧基因以及脂肪酸相关基因表达的影响，获得定点整合阳性单克隆细胞的 效率，同时比较有无MAR序列介导转基因细胞中hFAD3基因的表达量，结果 如下： 1．针对牛NCAPG—LCORL位点成功构建了Cas9切割载体：pCas Guide—B。 利用人工合成人源化hFAD3基因，成功构建了5种hFAD3基因定点整合载体： C2(5’arm-CAG—hFAD3-PolyA一3’arm)、 M2(5’arm—MAR-CAG-hFAD3一PolyA—MAR一3’arm)、 P2(pGT-C 1一LHA—RHA—hFAD3)、C22(LHA-CAG—hFAD3一PolyA一3’arm)和 CRL(LHA-CAG—hFAD3-PolyA—RHA、l。 2．对转染后细胞DNA、RNA、脂肪酸水平进行分析。1)PCR鉴定及测序 结果表明，实现了多种hFAD3基因定点整合载体在牛NCAPG．LCORL位点的 定点整合。2)外源基因hFAD3在RNA水平正常表达。3)Real—time quantitati