急性毒性试验 D50的测定.docVIP

PAGE PAGE 4 开放性实验总结报告 学生姓名 班级 学号 所在院系 专业 开放实验室名称 日期 2013-5-5 北京理工大学实验室设备处 制 一、实验项目概况 开放实验题目： 实验动物的基本操作及其相关技术 实验题目类型： □参与科研 □科技活动 √自选实验 □素质培养 指导教师及实验技术人员姓名： 李岩 实验项目起止日期：2013-4-5至2013-5-5 利用何种时间段开展实验：课余时间 开展实验的累计总学时数：32学时 实验项目基本原理： 急性毒性试验是临床前新药安全性评价的第一步，与其它毒性实验相比具有简单、经济、易行等特点。因此新药研究开发时往往通过该项试验，尽可能多的了解一些新药的毒理学特点，为早期判断侯选新药是否具有研究开发价值提供毒性强度资料。通常测定药物ED50及LD50以初步估计药物毒性大小。 实验项目的实验方法概述： 给不同组的小白鼠腹腔注射不同剂量的戊巴比妥钠，并观察记录各组别小鼠的行为变化，通过比较不同组别小鼠出现死亡的数量来计算LD50。 实验项目的仪器设备组成情况： 天平，1000ul的移液枪，200μl移液枪，2ml离心管，1ml注射器，手术器械(包括剪刀、镊子等) ，鼠笼，离心管架 实验项目的消耗材料明细： 乳胶手套，KM小鼠,封口膜 实验项目的主要结论：戊巴比妥钠的半数致死量为134.32mg/kg 用 Bliss 法计算半数致死量，回归方程 y(Probit)=-24.916+14.058Log(D) 半数致死量 LD50=134.32mg/kg LD50(Feiller校正)95%的可信限=92.405--205.57mg/kg LD5=102.59mg/kg LD95=175.85mg/kg 二、实验项目技术报告 1．实验原理 戊巴比妥钠属于巴比妥类镇静催眠药，对中枢神经系统有普遍性抑制作用，可起到镇静、催眠、抗惊厥作用。一定剂量的戊巴比妥钠引起一般实验动物死亡。半数致死量（LD50）,即在一群实验动物中，能使实验动物一半死亡的药量，其值越大越好。 2．实验内容 (1) 探测戊巴比妥钠LD50的剂量范围。 (2) 确定组数并计算各组剂量。 （3）正式实验：给不同组的小白鼠腹腔注射不同剂量的戊巴比妥钠，并观察记录各组别小鼠的行为变化及死亡情况。 （4）记录实验结果，并计算LD50。 3．实验方法： 1、预试溶液配制和样品处理（预实验） (1)探索剂量范围： 取小鼠9到12只，以3只为一组，分成3到4组，包括组距较大的一系列剂量，按组分别腹腔注射戊巴比妥钠溶液，观察出现的症状并记录动物死亡数，找出引起0及100%有效剂量的所在范围，此即上下限剂量Dn和Dm。 (2)：确定组数并计算各组剂量 eq \o\ac(○,1)确定组数《G》：根据适宜的组距确定组数，一般分为5到8个剂量，这里我们分为5组，按等比级数增减 eq \o\ac(○,2)计算各组剂量：在找出Dm、Dn和确定组数后，课按下列公式求出公比rr=lg-1[(lgDm—lgDn)/(G—1)].再按公比计算各组剂量Dl-Dm,其中D1=Dn=最小剂量。 eq \o\ac(○,3)配置等比药液系列，让每只小鼠给药量相等，一般为0.1ml/10g体重 经过预实验的五个剂量浓度分别是77、96、120、150、190mg/kg,相应浓度：0.77、 0.96、1.2、1.5、1.9%，在随后的急性毒实验中对这些剂量进行验证 2、急性毒性试验： 昆明种小鼠共15只，实验前一天晚禁食不禁水，实验当天称重，标记，随机分组。给5组小鼠分别按77、96、120、150、190mg/kg,腹腔注射，给药后观察动物死亡情况。记录小鼠死亡时间，死亡数目。利用Bliss法计算LD50。 分组 动物数（N） 剂量（mg/kg） 对数剂量（X） 动物死亡数（n） 死亡率（P=n/N） 1 2 3 4 5 3 3 3 3 3 77 96 120 150 190 1.89 1.98 2.08 2.18 2.28 0 0 1 2 3 0％ 0％ 33.3％ 66.7％ 100％ 表1 药物对小白鼠产生效应情况 【实验结果】：LD50的测定 依据药物剂量依次给药。利用Bliss法计算LD50 样品名称戊巴比妥钠 实验动物昆明小鼠 给药途径腹腔注射 实验日期2013.5.5