传染病血清标志检测指标地发展与应用.pptVIP

传染病血清标志物 1.感染性疾病筛查 2.HBV的检测 3.HCV的检测 4.HIV的检测 感染性疾病筛查 HBV、HCV、HIV等是感染性疾病术前筛查的重要指标 2000年卫生部184号文颁发了“临床输血技术规范”的通知，特别强调了手术病人术前的筛查项目 国内感染性血清标志物检测特点 手工操作为主,自动化使用较少 检测方法较多, ELISA方法占绝大部分 使用仪器和试剂较混乱,试剂多达30几家,仪器多达50多种 实验室之间检测结果存在较大差异 酶联免疫法（ELISA）——术前病人筛查传统方法 微板法固相载体 电化学发光免疫测定（ECL）——输血病人筛查自动化方法 方法学对比 传统（ELISA） 优点： 降低成本 可实现自动化 缺点： HOOK效应引起的假阳性 非特异反应 交叉污染引起的假阳性 灵敏度低,对于窗口期感染的检出率低,容易导致假阴性的出现 传染病血清标志物 1.感染性疾病筛查 2.HBV的检测 3.HCV的检测 4.HIV的检测 HBV疾病的发展 乙肝血清学标记物检测要点 乙肝表面抗原（HBsAg） 1963年由 Blumberg在澳大利亚土著人血中发现，称为澳大利亚抗原（即以前所谓的“澳抗”）；又称为肝炎相关抗原（HAA）；1974年正式定名为乙型肝炎病毒表面抗原。 HBsAg有一个特异的共同抗原决定簇“a”和至少两个亚型决定簇“d/y”和“w/r”，最常见的血清型为adw、adr和ayw。 最常用的测定方法为ELISA，使用针对HBsAg的a决定簇的单克隆和多克隆抗体，为双抗体夹心测定模式。 血清中检出 HBsAg是乙型肝炎的早期诊断指标之一 ——出现时间：HBV感染后2～6个月（潜伏期） HBsAg检测易出现“假阴性”结果 HBsAg含量低于所用方法的测定下限之下 ——如感染的“窗口期”、急性期后或恢复期、自限性感染末期的携带者等。 编码HBsAg的HBV S基因的突变。 ——HBV容易发生突变，较其他DNA病毒的突变率要高10倍；S基因发生突变可导致HBsAg的 a决定簇发生改变，最相关的突变是G145R、K141E和T131I以及在122与123位残基之间3个氨基酸的插入，可明显影响HBsAg的抗原结构。 丙型肝炎病毒（HCV）与丁型肝炎病毒（HDV）重叠感染对HBV复制和/或HBsAg表达的抑制作用 测定方法所用抗体对 HBV不同基因型检测敏感性的不同。 HBsAg 检测的挑战之一： 对于低水平HBsAg的检测 HBsAg 是 乙肝感染最早出现的血清学标记物灵敏度 是评价表面抗原的最重要的指标 中国低水平HBsAg的状态 浙江大学第一附属医院在2002年做的评估如下： 8089例病人中2.34%5ng/ml 816表面抗原阳性的人群中23.16% 5ng/ml 其中84例1ng/ml(44.4%) 33例 2, 1ng/ml(17.5%) 72例 5,2ng/ml(38.10%) 根据HBsAg II在华西医院的评估结果估计： 每100例HBsAg II阳性的标本中，华西的检测方法会漏检5例。 国内外HBsAg诊断试剂灵敏度评估国家参考品adr血清的检测结果 HBsAg 检测的挑战之二： 缩短窗口期 与 ELISA 试剂窗口期相差平均20天 HBsAg 检测的挑战之三; 对于突变病毒株HBsAg的检测 最常见的HBsAg突变位点 S基因的突变率 1988年意大利研究 2.0%的接种疫苗的人会感染HBV，确认是感染突变病毒株 这些患者的血清学表现为表面抗原和表面抗体同时阳性 其中最重要的突变是G145R，这个突变可以保持非常高的复制性 其中发现的免疫接种的婴儿被感染多是由于这个突变造成的家庭间的水平传播 突变的重要原因 突变原因： 自发突变（HBV聚合酶链反应的高出错率） 选择性压力下的突变,疫苗接种/高效价免疫球蛋白的应用 ---疫苗的广泛应用，促使HBV 发生变异的免疫压力逐渐增大，变异的机会增加 治疗抑制（拉米夫定） 对于突变株无法识别也是漏检的原因之一 HBsAg 检测的挑战之四: 不同亚型和基因型的检测 HBV有多个基因型和血清亚型 依据HBV全基因核苷酸序列异源性/ 8%或者s基因区核苷酸序列异源性/4%为分型标准，HBV可以分为A－H的八个基因型。 依据HBV的d/y(122-134); a(139-147);w/r(159-160)等决定簇的变化，将HBV分为四个主要的血清亚型 不同的亚型可以同属于一个基因型 同一个亚型又可以分属不同基因型 可靠地检测HBsAg不同基因型 罗氏新一代的表面抗原在此评估中没有发现突变漏检 Elecsy