KLF1基因在上皮性卵巢癌中的表达及其甲基化分析.docxVIP

中文摘要中文摘要 中文摘要 中文摘要 背景：妇科肿瘤中，卵巢癌的发病率居第三位，但其死亡率却居首位【l】。在 过去50年中，卵巢癌死亡率居高不下，其主要原因之一是对卵巢癌的发生发展 机理缺乏足够的了解，现有的治疗方案也缺乏针对性。KLFl 1基因属于KLF家 族成员，是一种转录抑制因子，参与并调节细胞增殖，细胞周期和细胞凋亡等多 种生命活动，在TGF 13信号通路中发挥重要作用。KLFI 1基因与多种肿瘤的发 生发展密切相关。研究表明，KLFll基因的表达量在多种肿瘤细胞【40埘，明显下 调，使其抑制肿瘤细胞的作用大大降低。最近研究表明抑癌基因过度甲基化可以 抑制基因的表达【5引，尤其是某些抑癌基因启动子区甲基化水平的异常增高在肿 瘤的发生发展过程中起到了不容忽视的作用。 目的：本研究旨在探究KLFll基因在上皮性卵巢癌中的表达及其甲基化在 卵巢癌发生发展过程中的作用。作为实验性研究，一方面检测上皮性卵巢癌及正 常卵巢组织中KLFIl基因及相关基因Smad2、Smad3、Smad7和TGF 6的表达， 分析KLFIl基因在TGF 13信号通路中的作用。另一方面探究KLFll基因在上皮 性卵巢癌与正常卵巢组织中甲基化程度差异。 方法：选取47例上皮性卵巢癌组织和13例正常卵巢组织。手术切除标本立 即置液氮速冻，后转．80℃保存。提取组织DNA和总RNA，将RNA反转录合成 cDNA。荧光定量PCR检测KLFll、Smad2、Smad3、Smad7和TGF 13基因的表 达量。DNA经Bisulfite处理后，巢式PCR扩增目的基因，切胶回收，连接pGEM-T 载体，转化入DH5 Q感受态细胞，挑取单克隆送检测序。应用在线网站 http：／／quma．cdb．riken．jp／对数据进行统计学分析，显著性水平P0．05。 结果：定量PCR结果显示KLFll基因在上皮性卵巢癌中的表达量明显低于 正常卵巢，尤以II期上皮性卵巢癌中的平均表达量最低。Smad2及Smad3基因 在上皮性卵巢癌中的表达均比正常卵巢有所降低。Smad7及TGFl3基因的表达 与正常卵巢相比较无统计学差异。测序结果显示上皮性卵巢癌中的甲基化概率明 显高于正常卵巢，且在I期上皮性卵巢癌中最高。 结论：KLFll基因作为一种转录抑制因子，在上皮性卵巢癌中的表达受到 明显抑制。上皮性卵巢癌中KLFll基因启动子区高甲基化状态抑制其表达。上 皮性卵巢癌早期，KLFll基因的表达抑制最明显与其此时启动子区甲基化程度最 高相关，KLFll基因启动子区甲基化是上皮性卵巢癌的早期事件，DNA甲基化 在上皮性卵巢癌的发生过程中起到关键作用。上皮性卵巢癌中，作为TGFB信 号通路下游的作用因子，KLFI l基因通过Smad2和Smad3基冈影响TGF p信号 中文摘要通路，而非通过Smad7基因影响TGF 中文摘要 通路，而非通过Smad7基因影响TGF B信号通路。 关键词：上皮性卵巢癌，KLFll，基因表达，DNA甲基化 Ⅱ AbstractAbstract Abstract Abstract Background：The incidence rate of ovarian cancel-is the“rd among all the gynecologic tumors，while its mortality rate is the first IH．In the past 50 years，there is no significant improvement in the therapy of ovarian cancer．One of the key reasons is that the mechanism of the carcinogenesis and development of ovarian cancer is unclear．KLF 1 1 gene belongs tO the KLF family,as a transcription inhibiting factor, KLF l l regulates many life processes，such as cell proliferation，cell cycle and apoptosis，and further plays roles in the generation and development of tumor throuth TGF 13 patyway．The expression of KLF1 1 is reduced in many callcers【401，and its effects in cancer are reduced．Recent studies