IL17对大鼠肝星状胞胶原代谢的影响及其机制探讨.docxVIP

温州医学院硕士学位论文IL一17对大鼠肝星状细胞胶原代谢的影响及其机制探讨 温州医学院硕士学位论文 IL一17对大鼠肝星状细胞胶原代谢的影响及其机制探讨 中文摘要 目的 本文研究白细胞介素17(IL-17)对大鼠肝星状细胞(HSC—T6)增殖、COL I、TIMP一1表达的影响及细胞外信号调节激酶(ERK)信号通路在此过程中的调 控作用，探讨IL—17对肝星状细胞增殖、胶原代谢的影响及其可能机制。 方法 1．采用不同浓度的工L一17(Ong／mL、lng／mL、lOng／mL、lOOng／mL、500ng／mL)处 理体外培养的大鼠肝星状细胞HSC-T6，应用四甲基偶氮唑蓝法(M订法)检测不 同浓度的IL一17处理不同时间(24h、48h、72h)后对HSC-T6细胞体外增殖的影 响，采用RT—PCR和ELISA法检测不同浓度的IL-17作用HSC—T6 24h后COL I和 TIMP一1 mRNA和蛋白的表达量。得出最佳药物浓度和作用时间进行后续实验。 2．根据以上实验结果，我们选择lOOng／mL IL一17作为后续实验。采用MTT法、 RT—PCR法和ELISA法检测HSC—T6经ERK信号通路特异性阻滞剂PD98059 (20umol／L)干预后IL一17(100ng／mL)对HSC—T6增殖、COL l和TIMP-1 mRNA及蛋 白表达的影响。 3．采用western blot法检测IL一17(100ng／mL)作用HSC-T6后不同时间点(Omin、 5min、15min、30min)后p-ERKl／2、ERKl／2和GAPDH的表达情况。 结果 1．不同浓度的IL一17(Ong／mL、lng／mL、lOng／mL、lOOng／mL、500ng／mL)处理体 外培养的大鼠肝星状细胞HSC—T6 24h后，细胞增值OD值分别为0．304+0．028： 0．307±0．027；0．321±0．013；0．324±0．012；0．326±0．079；作用48h后OD 值分别为0．367±0．032；0．372±0．032；0．411±0．024；0．500±0．018；0．524 ±0．0117；作用72h后OD值分别为0．671±0．027；0．717±0．048；0．765± 0．037：0．853±0．038；0．871±0．046。显示出浓度一时间依赖性。作用24h各浓 度组与对照组比差异无统计学意义，作用48、72h除lng／mL组与对照组比差异 无统计学意义外，其余各组与对照组比差异均有统计学意义(P0．05)。 2．不同浓度的IL一17(Ong／mL、lng／mL、lOng／mL、lOOng／mL、500ng／mL)处理体 外培养的大鼠肝星状细胞HSC—T6 24h后，COL I mRNA表达量分别为0．381± 0．055：0．406±0．057；0．469±0．05l；0．564±0．034；0．676±0．040。TIMP-1 mRNA 表达量分别为0．447±0．024；0．469±0．033；0．542±0．016；0．683±0．024； 0．836±0．041。COL I蛋白分泌量分别为10．359±2．701；12．846±3．778：28．764 ±4．156；49．231±1．304；78．793±9．377。TIMP一1蛋白分泌量分别为53．056 3 温州医学院硕士学位论文±6．670：67．578±5．635；137．082±11．070；194．598±8．760：254．682±12．008。 温州医学院硕士学位论文 ±6．670：67．578±5．635；137．082±11．070；194．598±8．760：254．682±12．008。 以上结果除ing／mL组与对照组比差异无统计学意义外，其余各组与对照组比差 异均有统计学意义(P0．05)。 3．经ERK信号通路特异性阻滞剂PD98059(20umol／L)干预后，IL-17促HSC-T6 增殖、COL I和TIMP—ImRNA和蛋白表达的作用受到明显的抑制，与IL-17组比差 异均有统计学意义(P0．05)。 4．IL一17(100ng／mL)刺激体外培养的HSC-T6后，能明显激活ERK信号转导通路， 并呈现时间依赖性，刺激5min后即可见p-ERKI／2活性增强，作用15min后 p-ERKI／2活性继续增强并达到最高峰，随后呈下降趋势，但作用30min后仍有 较高表达。 结论 I．IL—17能促进肝星状细胞HSC—T6增殖，并呈现一定的浓度一时间依赖性。 2．IL一17能促进肝星状细胞HSC—T6 COL I和TIMP-ImRNA及蛋白的表达，并呈现 一定的浓度依赖性。 3．