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2、菌落计数方法 （1）霉菌和酵母菌种属繁多，采用一种培养基和培养条件，不可能适合所有霉菌和酵母菌生长繁殖。故本法的测定结果只能是在本法规定的条件下平板生长的霉菌和酵母菌菌落。 （2）霉菌计数一般以72h报告之。但有些霉菌的生长速度较快，应在24h、48h、72h分别计数。如根霉、毛霉，其菌落特征为菌丝呈毛丝状，蔓延生长而影响其他菌落的计数，遇此情况应及时取出计数。 （3）霉菌生长过程中，很快形成孢子，成熟的孢子散落在培养基上，又可萌发形成新的菌落，因此在观察过程中，不要反复翻转平板，以免影响结果的准确性。 （4）以肉眼直接标记计数，必要时用放大镜检查，以防遗漏。 3、菌数报告方法 （1）选择菌落数在30~100之间的稀释度平板计数，以该稀释度的平均菌落数乘以稀释倍数报告之。 （2）各级平均菌落数不足30时，以最低稀释度平均菌落数乘以稀释倍数报告之。 （3）报告的规则同细菌菌落报告方法。 （五）大肠杆菌的检验 （六）金黄色葡萄球菌的检验 （七）铜绿假单胞菌的检验 铜绿假单胞菌属于假单胞菌属，菌体分布极广（空气、水、正常人的皮肤、肠道、上呼吸道等）。对人类有致病力，特别是在大面积烧伤、烫伤患者、眼疾等，常因感染铜绿假单胞菌后病情加重，造成有伤处化脓，并引起败血症等，眼角膜溃疡，甚至失明。因此一般眼科制剂和外伤用药规定不得检出铜绿假单胞菌。 1、铜绿假单胞菌的特征 铜绿假单胞菌为细长的革兰氏阴性小杆菌，菌体长短不一，无荚膜，无芽孢，菌体一端有细长单一鞭毛，运动极为活泼，有专性需氧菌，菌落扁平，表面湿润，呈灰白色。该菌的最大特点是产生水溶性蓝绿色色素。在一般培养基上生长良好，最适宜温度为37℃，42 ℃仍然生长，5 ℃则停止生长，此点可作为与其他假单胞菌相区别。 2、生化试验 检验铜绿假单胞菌的生化试验有：氧化酶试验、明胶液化试验、硝酸盐还原产气试验、绿脓色素试验、41 ℃生长试验。 第五节 环境的微生物学检测 一、空气洁净度的微生物检测 二、水质的微生物学检验 三、活性污泥中微生物生物量的测定 微生物和其生存的环境存在着密切的关系，它们之间相互适应、相互影响，一定的环境中存在一定类群的微生物，微生物也能改变环境质量。因此，环境质量的高低也可以利用微生物来进行检测，它可以根据环境中存在的种类和数量来反映环境质量。 一、空气洁净度的微生物检测 空气中有较强的紫外辐射，具有较干燥、温度变化大、缺乏营养等特点。所以，空气不是微生物生长繁殖的场所。虽然空气中微生物数量多，但只是暂时停留。 微生物在空气中停留时间的长短由风力、气流和雨、雪等气象条件决定，但它最终要沉降到土壤、水中、建筑物和植物上。 （一）空气微生物的种类、数量和分布 空气中微生物来源很多，尘土飞扬可将土壤微生物带至空中，小水滴飞溅将水中微生物带至空中，人和动物身体的干燥脱落物，呼吸道、口腔内含微生物的分泌物通过咳嗽、打喷嚏等方式飞溅到空气中。 室外空气中微生物数量与环境卫生、环境绿化程度等有关。 室内空气微生物数量与人员密度和活动情况、空气流通程度关系很大，也与室内卫生状况有关。 空气微生物没有固定类群，在空气中存活时间较长的主要有芽孢杆菌、霉菌和放线菌的孢子、野生酵母菌、原生动物等。 （二）空气微生物的卫生标准 空气是人类与动植物赖以生存的极重要因素，也是传播疾病的媒介。 为了防止疾病传播，提高人类的健康水平，要控制空气中微生物的数量。 目前，空气还没有统一的卫生标准，一般以室内1m3空气中细菌总数为500~1000个以上作为空气污染的指标。 （三）空气微生物检测 我国检测空气微生物所用的培养皿直径为90mm，有的用100mm的。 评价空气的洁净程度需要测定空气中的微生物数量和空气污染微生物。 测定的细菌指标有细菌总数和绿色链球菌，有必要时则测病原微生物。 1、空气微生物的测定方法 （1）固体法 ①平皿落菌法：将营养琼脂培养基熔化倒入90mm无菌平皿中制成平板。将它放在待测点（通常设5个测点），打开皿暴露于空气中5~10min，以待空气微生物降落在平板表面上，盖好皿盖，置于培养箱中培养48h后取出计菌落数，即为落菌数。 ②撞击法：以缝隙采样器为例，用吸风机或真空泵将含菌空气以一定流速穿过狭缝而被抽吸到营养琼脂培养基平板上。狭缝长度为平皿的半径，平板与缝的间隙有2mm，平板以一定的转速旋转。通常平板转动一周，取出置于37℃恒温箱中培养48h，根据空气中微生物的密度可调节平板转动的速度。 （2）过滤法 过滤法用于测定空气中的浮游微生物，主要是浮游细菌。该法将一定体积的含菌空气通入无菌蒸馏水或无菌液体培养基中，依靠气流的洗涤和冲击使微生物均匀分布在介质中，然后取一定量的菌液涂布于营养琼脂平板上，或取一定量的菌液于无菌培养皿中，倒入10mL熔化（45℃）的营养琼脂培养基，混匀，