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吸光光度法 2003年5月 教学目标 紫外-可见分光光度法简介 一、光的基本性质 2、单色光、复合光与光的互补 三、紫外-可见分光光度法的基本原理 1、朗伯—比耳定律 关于K： K 的物理意义：单位厚度、单位浓度溶液对一定波长光的吸光度。 与溶液性质、温度和入射光波长有关。 K越大，吸收能力越强，灵敏度越高。 K与浓度单位之间的变化关系（P9） 摩尔吸光系数ε 吸光物质的特征常数；在最大吸收波长λmax处，常以εmax表示 。 在温度和介质条件一定时，ε 仅与吸光物质的结构与性质有关，可作为定性鉴定的参数； 不随浓度c 和光程长度b 的改变而改变：ε＝A/b c?。 ε 在数值上等于浓度为1 mol/L、液层厚度为1cm时该溶液在某一波长下的吸光度。 吸光能力与测定灵敏度的度量； εmax越大表明该物质的吸光能力越强，测定的灵敏度越高。 ε 105：超高灵敏 ε =(6～10)×104：灵敏 ε104：不灵敏 2、应用朗伯—比耳定律时应注意的问题 3、朗伯—比耳定律的应用 吸 收 曲 线 标准（工作）曲线 朗伯—比耳定律的偏离 偏离原因 标准曲线的线性 四、紫外-可见分光光度法分类 紫外-可见分光光度法的特点 五、紫外-可见分光光度计 2、紫外-可见分光光度计的类型 3、紫外-可见