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高效液相色谱法应用讲座 台州市药品检验所 曾茂法 HPLC实验操作应知 HPLC操作操作流程 流动相的配制 色谱柱使用与维护 实验操作注意事项 检测器 数据处理 1 概述 定义 HPLC——用高压输液泵将规定的流动相泵入装有填充剂的色谱柱进行分离测定的色谱方法。 仪器结构简介 仪器组成 根据需要配置流动相在线脱气装置、梯度洗脱装置、自动进样系统、柱后反应系统等。 泵 输液泵是HPLC系统中最重要的部件之一。泵的性能好坏直接影响到整个系统的质量和分析结果的可靠性。输液泵应具备如下性能：①流量稳定，其RSD应＜0.5%，这对定性定量的准确性至关重要；②流量范围宽，分析型应在0.1~10 ml/min范围内连续可调，制备型应能达到100 ml/min；③输出压力高，一般应能达到150~300kg/cm2；④液缸容积小；⑤密封性能好，耐腐蚀。 泵的使用和维护注意事项 ??? ①防止任何固体微粒进入泵体，常用的方法是滤过，输液泵的滤器应经常清洗或更换。??? ②流动相不应含有任何腐蚀性物质，含有缓冲液的流动相不应保留在泵内，尤其是在停泵过夜或更长时间的情况下。 ??? ③溶剂瓶内的流动相被用完。??? ④输液泵的工作压力决不要超过规定的最高压力，否则会使高压密封环变形，产生漏液。 附：高效液相色谱仪流程图 1.2 HPLC分离模式与主要分离机制 正