《DNA重组技术的基本工具》上课用解析.ppt

§1.1 DNA重组技术的基本工具 一、教学目标： 1.简述DNA重组技术所需三种基本工具的作用。 2.认同基因工程的诞生和发展离不开理论研究和技术创新。 二、教学重点： DNA重组技术所需的三种基本工具的作用。 三、教学难点： 基因工程载体需要具备的条件。 一、自学导引： 基因工程的原理： 1.概念： 2.基因工程又叫DNA重组技术。 3.过程：这种技术是在生物体 ，通过对 分子进行人工“剪切”和“拼接”，对生物的基因进行 和重新组合，然后导入受体细胞内，进行 繁殖，使重组基因在受体细胞内表达。 二、基础知识： 4.基因工程的特点： 1）它是一种按照人们意愿，定向改造生物遗传特性的技术。 2）在DNA分子水平上进行操作。 3）是在体外进行的人为的基因重组。 4）一旦成功，便可遗传。 5）主要技术是体外DNA重组技术和转基因技术。 练习1、 下列关于限制酶的说法不正确的是 A．限制酶广泛存在于各种生物中，微生物中很少分布 B．一种限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列 C．不同的限制酶切割DNA的切点不同 D．限制酶的作用是用来提取目的基因 练习2、 限制酶是一种核酸切割酶，可辨识并切割DNA分子上特定的核苷酸碱基序列。下图为四种限制酶BamHI，EcoRI，HindⅢ以及BglⅡ的辨识序列。箭头表示每一种限制酶的特定切割部位，其中哪两种限制酶所切割出来的DNA片段末端可以互补黏合？其正确的末端互补序列为何？ A. BamHI和EcoRI；末端互补序列—AATT— B. BamHI和HindⅢ；末端互补序列—GATC— C. EcoRI和HindⅢ；末端互补序列—AATT— D. BamHI和BglII；末端互补序列—GATC— 练习3、 在基因工程中用来完成基因的剪接的工具是 A．限制酶和连接酶 B．限制酶和水解酶 C．限制酶和运载体 D连接酶和运载体 练习4、 依下图有关基因工程的工具酶功能的叙述，不正确的是 A．切断a处的酶为限制核酸性内切酶 B．连接a处的酶为DNA连接酶 C．切断b处的酶为解旋酶 D．切断b处的为限制性内切酶 练习5、 限制性内切酶Ⅰ的识别序列和切点是 —G↓GATCC—，限制性内切酶Ⅱ的识别序列和切点是—↓GATC—。在质粒上有酶Ⅰ的一个切点，在目的基因的两侧各有1个酶Ⅱ的切点。 ①请画出质粒被限制酶Ⅰ切割后形成的黏性未端。 ___________________________ ②请画出目的基因两侧被限制酶Ⅱ切割后形成的黏性未端。 _____________________ 本节内容小结： 1.知识梳理： DNA重组技术的基本工具： ①限制酶（分子手术刀）：识别特定的核苷酸序列并切割两核苷酸之间的磷酸二酯键； ②DNA连接酶（分子缝合针）：连接两核苷酸之间的磷酸二酯键； ③基因进入受体细胞的载体（分子运输车）：最常用的是细菌质粒，还有λ噬菌体的衍生物、动植物病毒等。 2.方法、技巧、规律总结： 限制酶切割的是磷酸二酯键，而DNA连接酶连接的正是两个断开此键的DNA片段。“分子运输车”是目的基因进入受体细胞的载体，它具有的若干特点是基因工程鉴定、选择、表达的关键，可以说，没有它，目的基因即使进入受体细胞，也难以稳定保存，更谈不上复制和表达。 3.思维误区提示： DNA连接酶与DNA聚合酶根本不是同类酶，其功能特点大不相同，注意其区别。 4.DNA连接酶和 DNA聚合酶的异同： 基因工程中所用的连接酶有两种：从大肠杆菌中分离得到的E·coli连接酶、从T4噬菌体中分离得到的T4连接酶。这两种酶的催化反应基本相同，都是连接双链DNA的缺口，而不能连接单链DNA。连接酶和聚合酶的作用都是形成磷酸二酯键。 DNA聚合酶只能将单个核苷酸加到已有的核苷酸片段的3’末端的羟基上，形成磷酸二酯键；而连接酶是在两个DNA片段之间形成磷酸二酯键。 4.DNA连接酶和 DNA聚合酶的异同： DNA聚合酶是以一条DNA链为模板，将单个核苷酸通过磷酸二酯键形成子链；而连接酶是将DNA双链上的两个缺口同时连接起来，因此连接酶不需要模板。 两者都是由蛋白质构成的酶，但组成和性质各不相同。 * 实质 结果 基本过程 操作水平 操作对象 操作环境 基因工程的别名 基因拼接技术或DNA重组技术 生物体外 基因 DNA分子水平 人们需要的新的生物类型和生物产品 切割 → 拼接 → 导入 → 表达 基因重组 总结： 基因工程培育抗虫棉的简要过程： 普通棉花(无抗虫特性) 苏云金芽孢杆菌 获取 抗虫基因 与运载体DNA拼接 导入 棉花细胞(含抗虫基因) 棉花植株(有抗虫特性) 上述培育抗虫棉的关键步骤是什么？ 基因工程培育抗虫棉的关键