细菌形态结时构观察.pptVIP

实 验 二 细菌形态和结构观察（Ⅰ） （细菌的简单染色和革兰氏染色） 一、实验目的 1、观察细菌菌落征。 2、掌握细菌简单染色、革兰氏染色技术。 3、在油镜下观察细菌个体形态。 二、实验原理 1、细菌菌落特征 2、细菌基本形态 3、细菌革兰氏染色机理 三、实验材料 1、菌种：大肠杆菌（Escherichia coli）、枯草芽孢杆菌（B.subtilis）、金黄色葡萄球菌（S.aureus）（培养18~24 h的菌落平板各一个）。 2、染液 （1）简单染色：吕氏美蓝染液或齐氏石炭酸复红染液。 （2）革兰氏染液：草酸铵结晶紫染液、革兰氏碘液、95%乙醇、番红染液。 3、其他物品：普通光学显微镜、载玻片、接种环、镊子、酒精灯、无菌水、吸水纸、香柏油、香柏油、二甲苯、擦镜纸。 四、实验步骤 1、菌落形态观察： 2、细菌简单染色： 3、细菌革兰氏染色。 细菌革兰氏染色过程 涂片→干燥→固定→初染（草酸铵结晶紫染色1min）→水洗→媒染（碘液冲洗后覆盖1min）→水洗→脱色（95％乙醇脱色至流下乙醇无色为止）→立即用水冲洗→复染（番红染色2～3min）→水洗→干燥→镜检 染色结果 染色结果 染色结果 染色结果 实 验 要 求 每个同学必须做枯草芽孢杆菌简单染色涂片。 每组同学必须做金黄色葡萄球菌或大肠杆菌革兰氏染色涂片。 每组同学必须做枯草芽孢杆菌革兰氏染色涂片。 五、实验报告 1、记录三种菌的革兰氏染色结果，绘出菌体细胞形态。 2、要得到正确的革兰氏染色结果，必须注意哪些操作？ 3、当你对未知菌进行革兰氏染色时，怎样保证操作正确，结果可靠？ * * 共有特征：湿润，较光滑，较透明，较粘稠，易挑取，质地均匀，颜色多样，菌落正反面及边缘与中央颜色一致。 特有特征： 有鞭毛：菌落大而平坦，边缘多缺刻、不规则 有糖被：菌落大，透明，呈蛋清状 有芽孢：菌落外观粗糙，“干燥”，不透明且表面多褶 基本形态：球状，杆状，螺旋状。 其它形态： 星形，方形，带柄状，畸形，衰退形 G＋：细胞壁厚，内肽聚糖含量高，且交联度大，网孔小，不含脂类。 G－ ：细胞壁薄，内肽聚糖含量低，交联度小，网孔大，脂类含量高。 革兰氏染色过程：初染→媒染→脱色→复染。 注意：菌落颜色、湿度、形状、大小、透明度、颜色、边缘是否规则等特征。 染色过程： 涂片→干燥→固定→染色（1min）→水洗→干燥→镜检 注意事项： 涂片：取菌量不能太大 干燥：自然干燥 水洗：水流不能直接冲在涂菌处 滴加少量水 挑取菌体 涂片 干燥 固定 染色 水洗 干燥 金黄色葡萄球菌革兰氏染色结果 大肠杆菌革兰氏染色结果 金黄色葡萄球菌和大肠杆菌混合菌样的革兰氏染色结果 枯草芽孢杆菌革兰氏染色结果 *