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细菌培养与革兰氏染色 傅琳 傅学钢 1.细菌革兰氏染色法 了解革兰氏染色原理 掌握革兰染色的方法 Click to add title in here 1 2 一.实验目的 二、实验材料 菌种：大肠杆菌、土壤提取菌 染料：草酸铵结晶紫液、卢戈氏碘液 95％乙醇、番红染液 其他：显微镜、载玻片、接种环、酒精灯、无菌生理盐水 三、基本原理 革兰氏染色法是细菌学中广泛使用的一种鉴别染色法。1884年由丹麦医师Gram创立。 细菌先经碱性染料结晶紫染色，再经碘液媒染后，用酒精脱色，在一定条件下有的细菌紫色不被脱去，有的可被脱去，因此可把细菌分为两大类，前者叫做革兰氏阳性菌（G+），后者为革兰氏阴性菌（G-）。 为观察方便，脱色后再用一种红色染料，如碱性番红等进行复染。阳性菌仍带紫色，阴性菌则被染上红色。 一般认为革兰氏阳性菌体内含有特殊的核蛋白质镁盐与多糖的复合物，它与碘和结晶紫的复合物结合很牢，不易脱色，阴性菌复合物结合程度低，吸附染料差，易脱色，这是染色反应的主要依据。 基本原理 四、方法与步骤 操作过程如下： 涂片 → 干燥 → 固定 → 草酸铵结晶紫染色（约1min） → 水洗 → 卢戈氏碘液媒染（约1min）→ 水洗 → 95%乙醇脱色（约30s） → 水洗 → 番红复染（1min）→ 水洗 →干燥 → 镜检 方法与步骤 关键点： 严格掌握乙醇脱色程度，如脱色过度，则阳性菌被误染为阴性菌；而脱色不够时，阴性菌被误染为阳性菌； 菌龄也影响染色结果，如阳性菌培养时间很长，或已死亡及部分自行溶解了，都常呈阴性反应。 方法与步骤 五、实验内容 1.对大肠杆菌、土壤提取菌分别进行革兰氏染色。 2.对大肠杆菌、土壤提取菌混合涂片进行革兰氏染色。 革兰氏阴性（G-） 实验内容 枯草芽孢杆菌（G+） 实验内容 阳性菌 实验内容 一种未知的霉菌 二、细菌培养法 实验目的 1、学习和掌握细菌分离与培养的各种基本技术 2、进一步熟悉和掌握微生物的无菌操作技术 实验仪器和材料 1、仪器： 接种环、酒精灯、记号笔、试管架等 2、材料： 普通琼脂平板培养基、斜面培养基 液体培养基、大肠杆菌菌落、土壤提取菌落 2.细菌培养法 平板划线法 斜面培养法 液体培养法 本实验的细菌培养法 细菌培养 平板划线接种法 步骤： 标记→灭菌接种环→取菌种→分离划线接种细菌（分为四个区域） →划线完毕，放入恒温箱培养 平板划线接种法 恒温箱培养 斜面培养基接种法 步骤： 标记 灭菌接种环 两斜面并持 接种细菌 接种完毕，恒温培养 （注意无菌操作） 斜面培养基接种法 液体培养基接种法 步骤： 标记 灭菌接种环 两液体管并持 接种细菌 接种完毕，恒温培养 （注意无菌操作） 液体培养基接种法 * * * *