兔抗SRBC免疫血清鉴定.pptVIP

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2019-01-04 发布于福建
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兔抗SRBC免疫血清鉴定.ppt

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兔抗SRBC免疫血清鉴定

实验三兔抗SRBC免疫血清的鉴定实验目的：掌握兔抗SRBC免疫血清鉴定的原理熟悉鉴定方法的操作及结果判定实验原理：若SRBC与其免疫血清相遇，出现肉眼可见的凝集块（凝集阳性），说明免疫血清中含有特异性抗SRBC抗体。当SRBC在试管中与相应的抗体结合后，在补体的作用下，将导致SRBC裂解，发生免疫溶血。反应体系中的SRBC和补体一定时，其溶血程度与免疫血清中抗体的效价呈正比，籍此可通过补体溶血试验测定抗体（溶血素）的效价。实验材料：免疫血清（实验二制备的抗血清） ——做1:100稀释 1％SRBC悬液补体（豚鼠新鲜血清）——做1:30稀释生理盐水无菌试管、吸管、试管架、恒温水浴箱、玻片实验步骤： 1、玻片凝集试验－鉴定免疫血清中有无抗体取一张玻片。在两边分别加生理盐水和免疫血清各一滴，然后各加一滴SRBC悬液，轻摇（或轻吹）玻片混匀，放置1－2min，若生理盐水侧均匀混浊，而免疫血清侧红细胞凝集成团，出现小颗粒，即为凝集试验阳性，说明免疫血清中有抗羊红细胞抗体。生理盐水+SRBC 抗血清+SRBC 第1管生理盐水0.5ml 溶血素0.25ml(1:100) 第2管生理盐水0.75ml 溶血素0.25ml(1:100) 第3管生理盐水1ml 溶血素0.25ml(1:100) 1:400 1:800 1:1600 1:3200 1:6400 1:12800 1:500 1:1000 1:2000 1:4000 1:8000 1:16000 2、补体溶血试验－测免疫血清的效价 1:300 1:600 1:1200 1:2400 1:4800 1:9600 第4-18管加生理盐水0.25ml 19号为阴性对照 (1)溶血素稀释 0.5ml 0.75ml 试管溶血素0.25ml （已加）补体1:30(ml) 生理盐水 (ml) 1% SRBC 结果 1 1:300 0.5 0.5 0.25 溶血或 2 1:400 0.5 0.5 0.25 不溶血 3 1:500 0.5 0.5 0.25 4 1:600 0.5 0.5 0.25 5 1:800 0.5 0.5 0.25 6 1:1000 0.5 0.5 0.25 7 1:1200 0.5 0.5 0.25 8 1:1600 0.5 0.5 0.25 9 1:2000 0.5 0.5 0.25 10 1:2400 0.5 0.5 0.25 11 1:3200 0.5 0.5 0.25 12 1:4000 0.5 0.5 0.25 13 1:4800 0.5 0.5 0.25 14 1:6400 0.5 0.5 0.25 15 1:8000 0.5 0.5 0.25 (2)按下表在上述1-19号管中加入下列成分试管溶血素0.25ml （已加）补体1:30(ml) 生理盐水 (ml) 1% SRBC 结果 16 1:9600 0.5 0.5 0.25 17 1:12800 0.5 0.5 0.25 18 1:16000 0.5 0.5 0.25 19 1.25 0.25 阴性对照结果判定：以呈现完全溶血的最高稀释度为效价。实验结果：观察并判定各自小组的效价。结果判定：观察溶血现象，以呈现完全溶血的血清最高稀释度为溶血素效价。溶血现象：完全溶血——清凉透明不溶血——混浊不透明试验结果：记录每个试管中的溶血情况；写出溶血素的效价。思考题：兔抗SRBC免疫血清的鉴定为什么采用玻片法？