MSI诊断检测方法和应用.pptVIP

在以后的研究中，相继在肺癌，胃癌，白血病等其它肿瘤也发现微卫星不稳定性 * 基因连锁分析发现导致HNPCC（遗传性非息肉病性结直肠癌）发生的分子基础是在2号染色体的p15‐16上[8]，Vogelstein和chapellel领导的研究组使用微卫星标记物研究了在2号染色体的p15‐16位点上是否有等位基因的丧失。结果表明，在HNPCC的p15‐16位 点没有等位基因的丢失，然而在被检测的14种肿瘤中发现有11种的核苷酸重复序列中存在有插入或缺失突变。另外，在一系列的散发性直肠癌中也发现有类似现象，但发生率较低。总之，在HNPCC 和散发性直肠癌中的微卫星不稳定性是遍布整个基因组的现象，并且可能是导致癌症发生的普遍机制。 * 遗传性非息肉病性结直肠癌（hereditary nonpolyposis colorectal cancer，HNPCC）是常染色体显性遗传综合征，简称“HNPCC”[1]。其诊断标准为： 一、家族中至少3人经病理确诊为结肠癌，且其中一人为其他2人的直系亲属； 二、必须累及连续2代人； 三、至少有1人大肠癌发病早于50岁； * ⅡB分期对应的是：T4a：肿瘤穿透腹膜脏层；duke’s B期：肿瘤穿透固有肌层。 ⅡC分期对应的是：T4b：肿瘤直接侵犯或粘连于其他器官或脏器；duke’s B期：肿瘤穿透固有肌层。 * MMR复合体可以识别顺铂从而引发DNA合成无用的单链并诱发凋亡，对顺铂具有耐药性的患者90%以上会表现出hMLH1和hMSH2的表达缺失。这都说明MMR系统与顺铂的耐药性密切相关； 抗癌药物首选氟脲嘧啶。结直肠癌化疗药物：5’氟尿嘧啶（5-FU）和卡培他滨。氟尿嘧啶是以抗代谢物而起作用，在细胞内转化为有效的氟尿嘧啶脱氧核苷酸后，通过阻断脱氧核糖尿苷酸受细胞内胸苷酸合成酶转化为胸苷酸，而干扰DNA的合成。 卡培他滨(Capecitabine)是一种可以在体内转变成5-FU的抗代谢氟嘧啶脱氧核苷氨基甲酸酯类药物，由罗氏公司研制，商品名称为希罗达，能够抑制细胞分裂和干扰RNA和蛋白质（protein）合成。 * hMSH2和hMLH1基因突变占所有检测到突变的90%以上 * 扩增片段大小范围是依据500个中国汉族个体数据确定，利用ABI3130xl遗传分析仪检测。 * 肿瘤组织中Penta C和Penta D分别有14%和35%的有变化，出现3峰。 * MSI诊断检测的方法和应用 主 要 内 容 微卫星不稳定的相关背景 MSI的检测意义 MSI检测方法 MSI检测试剂盒 背 景 介 绍 微卫星不稳定性(microsatellite instability, MSI)是指与正常组织相比，在肿瘤中某一微卫星由于重复单位的插入或缺失而造成的微卫星长度的任何改变，出现新的微卫星等位基因现象。 主要机制： ①DNA多聚酶的滑动导致重复序列中1个或多个碱基的错配 ②MS同源重组导致碱基对的丢失和插入 1993年，Altonen等首次发现，在HNPCC细胞中存在高频率的MSI。目前已发现MSI的肿瘤主要有3类： 一类为HNPCC病人发生的结直肠癌、子宫内膜癌以及卵巢癌,这一类肿瘤几乎都表现为MSI； 另一类为散发性结直肠癌,这一类肿瘤发生MSI概率约15％ ～30％； 第三类为包括肺癌、乳腺癌和胰腺癌在内的其它肿瘤,这一类肿瘤MSI发生频率相对较低。 背 景 介 绍 结直肠癌是是常见的消化道恶性肿瘤，我们每年有13万-16万人罹患结直肠癌，其发病率占肿瘤发病率的第三位，仅次于肺癌和胃癌。 HNPCC是常见的遗传性肿瘤综合症，遗传性结直肠癌是一个常染色体遗传疾病,目前研究表明微卫星不稳定性可能是遗传性结直肠癌发生的重要机制。 背 景 介 绍 具有MSI的散发性结直肠癌,具有不同的临床病理、分子生物学特征,表现为:发病年龄较小；对某些化疗药物(如5-FU、顺铂等)有原发性耐药; 生物学行为较好。 MSI-H是Ⅱ期结肠癌预后良好的一个标志物，也是患者不能从氟尿嘧啶单药辅助化疗获益的疗效预测指标。 背 景 介 绍 微卫星不稳定检测的意义 1. 检测MSI可以用于检测是否为Lynch综合征 结直肠癌的遗传易感性包括一些研究较清楚的遗传性综合征，例如Lynch综合征（又称之为遗传性非息肉病性结直肠癌，HNPCC）和家族性息肉病（FAP）。在HNPCC 和散发性直肠癌中的微卫星不稳定性是遍布整个基因组的现象，并且可能是导致癌症发生的普遍机制。 专家组推荐， MMR蛋白检测应强烈建议在所有50岁以下的结肠癌患者中开展，原因在于该群体中患Lynch综合征的可能性增加。而且，在一些中心，现在对所有的结直肠肿瘤组织进行免疫组化检测