《GBT13111-1991-谷物和大豆中赫曲霉毒素的测定方法》.pdfVIP

中华人民共和国国家标准 谷物和大豆中赭曲霉毒素 A GB/T 13111-91 的测定方法 Method for determination of ochratoxin A in cereal and bean ━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━ 1 主题内容与适用范围 本标准规定了谷物和大豆中赭曲霉毒素 A 的薄层色谱测定方法。 本标准适用于小麦、玉米和大豆中赭曲霉毒素 A 的测定。 在薄层板上赭曲霉毒素 A 的最低检出量为4ng 。本方法的最低检测量为 10 μg/kg 。 2 原理 用三氯甲烷-0.1mol/L 磷酸或石油醚- 甲醇/水提取样品中的赭曲霉毒素 A ，样品提取 液经液-液分配后，根据其在 365 nm 紫外光灯下产生黄绿色荧光，在薄层色谱板上与标准 比较测定含量。 3 试剂 以下试剂除特殊规定外均为分析纯试剂，水为蒸馏水或同等纯度的水。 3.1 石油醚(60～90℃或30～60℃) 。 3.2 甲醇。 3.3 三氯甲烷。 3.4 甲苯。 3.5 乙酸乙酯。 3.8 甲酸。 3.7 冰乙酸。 3.8 乙醚。 3.9 苯- 乙腈(98：2) 。 3.10 0.1mol/L 磷酸[c(H3PO4)=0.1mol/L]：称取 11.5g 磷酸(85%)加水稀释至 1000mL。 3.11 2mol/L 盐酸溶液[c(HCL)=2mol/L]：量取20 mL 盐酸，加水稀释至 120 mL。 3.12 4%氯化钠溶液。 3.13 0.1mol/L 碳酸氢钠溶液[c(NaHCO3)=0.1mol/L]：称取 8.4g 碳酸氢钠,加适量水溶解， 并用水稀释至 1000 mL。 3.14 硅胶 G：薄层层析用。 3.15 赭曲霉毒素 A( 以下简称OA)标准溶液：用苯-冰乙酸(99：1)配成 40 μg/mL 赭曲霉毒 素 A 贮备液，并用紫外分光光度计测定其浓度。浓度的测定参照 GB 5009.22 《食品中黄曲 霉毒素 B1 的测定方法》中2.14 条(赭曲霉毒素 A 的最大吸收峰波长333 nm ，分子量 403， 克 分子消光系数值为 5550) 。精密吸取贮备液，用苯稀释成每毫升含赭曲霉毒素A0.5 μg，赭 曲霉毒素A 标准液应置冰箱中避光保存。 4 仪器 所有玻璃仪器均需用稀盐酸浸泡，用自来水，蒸馏水冲洗。 4.1 小型粉碎机。 4.2 电动振荡器。 4.3 玻璃板：5cm ×20cm 。 4.4 薄层涂布器。 4.5 展开槽：内长 25cm、宽 6cm、高 4cm 。 4.6 紫外光灯：365 nm 。 4.7 微量注射器：10 μL 、50 μL 。 4.8 具 0.2mL 尾管的 10 mL ，小浓缩瓶。 5 分析步骤 5.1 提取 5.1.1 甲法 称取 20g 粉碎并通过 20 目筛的样品，置于200mL 具塞锥形瓶中，加入 100mL 三氯 甲烷 和 10mL 0.1mol/L 磷酸，振荡 30min 后通过快速定性滤纸过滤；取 20ml，滤液置于 250mL 分 液漏斗中,加 50mL 0.1mol/L 碳酸氢钠溶液振摇 2min,静置分层后，将三氯甲烷层放入另一 个 100mL 分液漏斗中(少量乳化层，或即使三氯甲烷层全部乳化都可放入分液漏斗中) ，加 入 50mL 0.1mol/L 碳酸氢钠溶液重复提取三氯甲烷层,静置分层后弃去三氯甲烷层(如三氯 甲烷层仍乳化,弃去,不影响结果) 。 碳酸氢钠水层并入第一个分液漏斗中,加约 5.5mL 2mol/L 盐酸溶液调节 pH2～3(用 pH 试纸测试) ， 加入 25mL 三氯甲烷振摇 2min ，静置分 层 后,放三氯甲烷层于另一盛有 100mL 水的 250mL 分液漏斗中,酸水层再用 10mL 三氯甲烷振 摇、 提取、静置，将三氯甲烷层并入同一分液漏斗中。振摇、静置分层,用脱脂棉擦干分液漏 斗下端，放三氯甲烷层于一 75ml 蒸发皿中，将蒸发皿置蒸汽浴上通风挥干。用约 8mL 三 氯 甲烷