生化分析知识点总结.docxVIP

PAGE \* MERGEFORMAT19 氨基酸 1 八种必须氨基酸的英文命名及缩写。 赖氨酸 Lysine Lys K 甲硫氨酸 Methionine Met M 缬氨酸 valine Val V 异亮氨酸 isoleucine Ile I 苯丙氨酸 phenylanine Phe F 亮氨酸 leucine Leu L 色氨酸 tryptophan Try W 苏氨酸 threonine thr T 2 俩种氨基酸组成多肽时，有几种？ 成二肽，有四种 成三肽时，有八种（仅供参考，不一定正确，有不同意见请指出来）。 二 酶分析 1酶活性的定义，国际常用的单位： 酶活性（enzyme activity）也称为酶活力，指酶促反应速率，即规定条件下在单位时间内产物的生成量或底物的减少量。 酶活性单位：表示酶的相对含量，指在一定条件下，单位时间内生成一定量的产物或消耗一定量的底物所催化的酶量。 a．国际单位IU（μmol/min） 定义：在规定条件下（25℃及其他最适条件），每分钟催化1μmol底物转变为产物的酶量，为1IU或1U。 1IU=1μmol/min。 B．Katal单位（mol/s） 定义：1Katal是在规定条件下，每秒钟催化1mol底物转变为产物的酶量。1Katal＝1mol/s。 IU与Katal单位的关系：1katal = 60×106IU， 1IU = 16.67nkatal 3 酶促反应 酶促反应的历程：延滞期，线性期，非线性期 a．酶促反应式： B．米氏方程 C．Km的含义与意义 ．Km的含义: 当Km=[S]时，可见Km值等于反应速率达到最大反应速率Vmax一半时的底物浓度。 Km的意义： Km是酶的一个特征性常数（其他如等电点）， Km的大小只与酶的性质有关 反映酶对底物亲和力的大小 选择酶的最适底物或天然底物 计算不同底物浓度时的反应程度 鉴别酶的种类 判断可逆反应的速率 判断酶偶联反应的限速反应 计算工具酶的用量 3.两种测定酶活性的方法： a．定时法 原理： 定时法是固定时间法的简称，是指测定反应开始后一段时间（t1～t2）产物的增加量或底物的减少量以测定酶活性的方法。该方法一般需要在反应进行到一定时间后用强酸、强碱、蛋白沉淀剂等终止反应。 优点：简单、不需要保温设备、不用考虑酶的活性。 缺点：如果不做预试验则无法了解其酶促反应进程（t1-t2）是否为零级反应，故难以确保测定结果的准确性。 b．连续检测法： 原理： 连续监测法是指在多个时间点连续测定产物（或底物）在线性期内的生成量（或消耗量）即零级反应速率以测定酶活性的方法，又称速率法、零级反应速率法、斜率法。 该方法是在一定的反应时间区段内（至少9～120s）每隔一定时间（常为2～30s）读取一次吸光度值，连续测定多点（至少4点），然后对吸光度数据作最小二乘法处理，再用线性期内的数据计算单位时间内的反应速率△A/min，最后计算出酶活性。 连续监测法的特点：属于即时观测，无需停止酶促反应、不需添加其他呈色试剂，可将多点的测定结果绘图连线，快速、直观查看酶促反应进程，很容易找到呈直线的线性期； 连续监测法要求不显色而是直接测定底物（或辅助底物即中间底物）或产物量的变化，因此，可以选择紫外吸收法或生色原显色法； 能够准确地控制温度、pH值和底物浓度等，要求仪器具有恒温装置及自动监测功能，半自动及全自动生化分析仪都能满足这些要求 ； 测定结果常较定时法高。 4.固定化酶和游离酶的优点和缺点： a．固定化酶 优点：增加了酶的活性和稳定性 可回收重复使用，降低了酶耗 酶反应过程便于控制 适用于连续反应 易于反应体系分离 对环境的耐受性增强 缺点：对酶的物理化学性质产生一定的影响。 b．游离酶 优点：易溶于水 于底物的作用面积大，反应充分 活性接近生理状态 缺点：难与底物分离 反应条件控制严格 不能反复利用，易失活 三．蛋白质分析 1. 蛋白质的盐析，变性及二者的区别 盐析：在蛋白质溶液中加入某些无机盐的浓溶液，使蛋白质的溶解度下降而从溶液中析出来的现象。 变性：在热、重金属、酸、碱、某些有机物等作用下，蛋白质的物理性质和生理功能发生改变的现象，称为蛋白质的变性。 蛋白质盐析和变性的区别与对比 2.蛋白质的序列分析：测得的是蛋白质的一级结构。 蛋白质的结构： 一级结构：蛋白质的氨基酸残基的序列， 一级结构的作用力：肽键，S-S键。 二级结构：α-螺旋，β-折叠，β-转角，无规卷曲