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应用易错PCR定向进化甘油脱氢酶-华侨大学学报自然科学版
3 1 6 ( ) Vo l. 31 No . 6
2010 11 Jo ur nal of H u aqiao U niversity ( Natur al Science) N ov. 20 10
: 20 10) 0 6066106
PCR
李梓君 方柏山 杨仲丽 刘嘉
( 36202 1)
: ( Err orPro ne P CR) ( K le bsiella p ne umoniae)
. O 96
gldA74 2. 73 . g ldA
74 g ldA74 ( A 964T )
. N i
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mmol L - 1 p H 11. 5 12. 5 65 55 .
: ; ; ;
: Q 554+ . 903 : A
( Gly cerol D ehydrog enase GD H ) ( D ihy drox yacet one
[ 1] +
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GD H[ 2] ( EC 1. 1. 1. 6) A er obacte r aerog e nes , E scherich ia coli , B aci l lus sub
st il is Cel l ul omonas sp . . 2 N A DP+ GD H ( EC 1. 1. 1. 72 EC 1. 1. 1. 56)
[ 3]
. 3 G DH
GD H[ 4] . G DH DH A 3
[ 5]
.
.
(
) . PCR
[ 6]
. PCR GDH
.
1
1. 1
E. coli BL 21 ( DE3) ( pET32g ldA ) pET32a( + )
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1. 2
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Om eg a ! A m er sco .
1. 3
1. 3. 1 甘油脱氢酶基因突变体文库构建 ( 1) Prim er ! 5∀ CGT CG GA T CCT A CA T GCG
: 200 8122 8
: ( 1957) . Em ail : f ang bs@ hqu . edu. cn.
: ( 97 3) ( 200 6A A 020103) ; (
662 ( )
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