脓汁与粪便标本中病原菌的检测实验报告.doc

WORD完美整理版 范文范例 参考指导 2016年秋季学期 微生物学实验报告 日 期：2016年11月7日 题目 脓汁和粪便标本中病原菌的检测 成绩 实验者 作者： 学号： 参与作者姓名： 年级专业 一、实验目的 1、了解医学微生物学主要的研究方法和手段，掌握基本技能和基本原理。 2、熟悉常见病原性球菌及常见肠道致病菌的检查程序，掌握各检查实验操作。 3、了解脓汁和粪便标本中病原菌的检测的临床应用及临床意义。 4、熟悉几种常用的细菌生化反应的名称、原理、方法、结果分析及用途。 5、熟悉抗生素对于不同细菌的作用机理。 6、树立牢固的无菌观念。 二、实验器材： 1、培养基：营养琼脂平板、伊红美兰平板、斜面、营养肉汤、半固体琼脂 2、标本：脓汁标本、粪便标本、空气细菌培养物、手指皮肤细菌培养物、细菌分离培养物、斜面培养物、营养肉汤培养物、药敏试验培养物 3、器材： 1）培养基的制备：天平、称量皿、药勺、锥形瓶、量筒、试管、试管架、刻度吸管、洗耳球、棉塞 、牛皮纸、橡皮筋、干粉培养基、酒精灯、火机。 2）细菌的分离培养：碘酒棉球，酒精棉球、眼科镊子、接种环。 3）细菌的纯培养: 接种环。 4）细菌的形态学检查：生理盐水、镜油瓶、拭镜纸、吸水纸、载玻片、结晶紫染液、芦戈氏碘液、95%酒精、稀释石炭酸复红、染色架、接种环。 5）细菌的生化试验:糖发酵管、抗菌素（青霉素、链霉素、庆大霉素）纸片、眼科镊子、接种针、接种环、小砂轮、葡萄糖发酵微量管、乳糖发酵微量管、兔血浆、生理盐水、载玻片。 6）结果分析：尺子。 三、方法与步骤 1、营养肉汤培养基的制备 取1.1g营养肉汤粉末于锥形瓶中，加入50ml蒸馏水，摇晃锥形瓶使其几乎完全溶解。将锥形瓶置于电陶炉上加热至沸腾，观察固体是否完全溶解，冷却后分装至试管内。 2、细菌的分离培养（平板划线分离法） 甲→脓汁标本→营养琼脂平板? 乙→脓汁标本→营养琼脂平板 丙→粪便标本→伊红美蓝平板? 丁→粪便标本→伊红美蓝平板 1）接种环烧灼灭菌，以免污染标本。 2）取标本3～5ul。 3）转动平板，当看到平板表面象镜面有反光的时候，保持这个角度，划线时就能看清划线痕迹，以便控制划线。 4）接种环与平板呈30～40度角，在平板表面上方，以曲线的形式，作大幅度来回连续划线，边划边退，线段要划得长而密集，每区划线不少于30条? 5）甲、乙烧掉接种环上多余的标本。 6）转动平板，通过第一区5～7次，使接种环重新沾上少量细菌，同样的方法划第二区。 7）转动平板，接种环通过第二区1次，划第三区，同样的方法划第四、五区。 注意：每区划线不少于30条，整个平板划线不少于150条线。上下两条线重叠不影响分离结果。 3、细菌的纯培养（斜面接种法） 甲→普通平板→黄色菌落→1支斜面 乙→普通平板→白色菌落→1支斜面 丙→ EMB平板→紫黑菌落→1支斜面 丁→ EMB平板→粉红菌落→1支斜面 1）接种环取菌后，伸入斜面底部，自下向上先拉一条细菌接种线。 2）再伸入底部，自下向上，作蜿蜒划线。 3）细菌涂布接种在斜面培养基的表面。 注意：斜面正面上2/3作标记：组号 + 金黄、白色、紫黑、粉红。 接种时，接种杆连接部不能碰到斜面培养基。 4、细菌的形态学检查（革兰染色法） 甲→金黄、紫黑 乙→白色、粉红 丙→金黄、紫黑 丁→白色、粉红 涂片→干燥→固定→染色 1）涂片：用取液枪取生理盐水 于洁净的载玻片上。接种环烧灼灭菌，取菌苔少许与盐水混匀，涂成大于1cm2均匀涂膜。涂毕，环移至涂膜中央侧立，待环内菌膜破裂，接种环烧灼灭菌，进行第二次涂片。 2）干燥：静置干燥或将其置于酒精灯上方加热干燥。 3）固定：手持载玻片一端，涂膜朝上，两个涂膜快速通过火焰外层3次，时间2～3秒钟。 4）染色：结晶紫 → 初染1分钟→水洗→卢戈氏碘液→媒染1分钟→水洗→95％乙醇→脱色约20秒钟→水洗→稀释品红→复染1分钟→水洗→吸干,镜检 注意:取菌适量,涂片均匀,水洗轻缓,脱色适当。 影响革兰染色的关键步骤是涂片和脱色。 5、细菌的生化试验 细菌的糖发酵实验 甲→紫黑→①葡萄糖 乙→紫黑→②乳糖 丙→粉红→③葡萄糖 丁→粉红→④乳糖 1）砂轮在糖发酵管液面上方2～3cm处切割，然后，向切口外侧分离掰断，管口烧灼灭菌。? 2）接种针针尖斜面取菌，伸入培养基内，在管壁上，上下研磨接种。退出接种针，烧灼灭菌。 3）管口朝向相同，放置在平皿内。 抗菌素敏感性试验（纸片扩散法） 甲→金黄菌液 乙→白色菌液