固相合成原理..ppt

The Peptide Quality Standard The Peptide Quality Standard  多肽固相合成基本原理 *  一、多肽合成简史 20世纪早期——Emil Fischer 引入肽与多肽的概念。 1920－1960——液相合成少数肽，但是纯度低、副产物多。 1963——Bruce Merrifield 建立固相多肽合成方法，solid-phase peptide synthesis (SPPS)。洛克菲洛大学电梯。1984，诺贝尔化学奖。 近40多年来，合成技术迅猛发展，合成超过100个长的肽已不是梦想。 *  二、多肽固相合成基本原理 按氨基酸顺序，定向形成肽键，得到目标分子； C末端的氨基酸固定在树脂上，反应， 过滤洗涤，切割； 主要介绍Fmoc策略（α氨基保护基团为Fmoc） *  脱保护 Fmoc：9－芴甲氧羰基（Fluorenylmethoxycarbonyl） MW：223.254 PiP：哌啶、六氢吡啶 （Piperidine） MW：85.15；密度：0.86g/ml； 熔点：－7℃；沸点：106℃ *  固相载体 Wang 树脂 2-Cl-Trt-氯树脂（Cys、His、Pro） Rink Amide MBHA 树脂 *  *  Fmoc的脱除 Fmoc基团的芴环基的吸电子作用使9-H具有酸性，易被较弱碱除去，反应条件很温和 ；哌啶进攻9-H,β消除形成二苯芴烯，很容易被二级环胺进攻形成稳定的加成物：Fmoc－PiP（取代度测定的就是其紫外吸收值） *  溶剂 DCM：二氯甲烷 （Dichloromethane） MW：84.94；密度：1.33g/ml；熔点：－96.7℃；沸点：39.8℃ 作用：溶胀树脂、洗涤树脂 MeOH：甲醇（Methanol） MW：32.04；密度：0.79g/ml； 熔点：－93.9℃；沸点：64.8℃ 作用：收缩树脂、洗涤树脂 DMF ：N,N-二甲基甲酰胺（N，N-dimethyformamideL） MW：73.1；密度：0.94g/ml； 熔点：－61℃；沸点：152.8℃ 作用：良好溶剂、溶胀树脂、洗涤树脂 *  缩合试剂 HBTU NMM HATU 苯并三氮唑-N，N， N-甲基吗啡啉 2-(7-偶氮苯并三氮唑) N’，N’，-四甲基脲 -N，N，N’，N’-四甲基 六氟磷酸酯 脲六氟磷酸酯 MW：379.3 MW：101.2 MW：380.2 密度：0.92 *  DIC HOBt N,N’-二异丙基 羟基苯骈三氮唑 碳二亚胺 MW：126.2 MW：135.1 密度：0.8 *  缩合原理 *  HATU/HBTU法 *  DIC/DCC法 *  缩合终点的判断 茚三酮检测（定性） 四氯苯醌检测（定性） 取代度测定（定量） *  提高缩合效率的方法 增加氨基酸投量 延长反应时间 提高反应温度 更换反应液 换用活性更高的缩合试剂 更换反应溶剂（魔鬼溶剂） 超声、微波 * The Peptide Quality Standard The Peptide Quality Standard