《核苷酸代谢与遗传信息的表达》-课件设计（公开）.pptVIP

由于基因缺陷，HGPRT缺失，表现为尿酸增高及神经异常。自毁容貌症患者在发病时会毁坏自己的容貌,用各种器械把脸弄得狰狞可怕.这种疾病患者常常被束缚在床上或轮椅上.自毁容貌症患者大多死于儿童时代,很少活到20岁以后.现有的医疗技术对此无计可施,而只能寄希望于基因治疗.基因治疗技术将大大提高人类的素质,降低新生儿遗传病的发生率.例如,对孕妇作例行的产前检查,一俟发现尚在母腹中的婴儿患有遗传性疾病,则马上就可施行基因手术. 半保留复制的实验证据: 1958年Meselson和Stahl用同位素15N标记大肠杆菌DNA,首先证明了DNA的半保留复制。 该实验首先将大肠杆菌在含15N的培养基中培养数代后，使其DNA中的碱基氮均转变为15N。然后将大肠杆菌移至只含14N的培养基中同步培养一代、二代、三代。分别提取DNA，作密度梯度离心，将具有不同密度的DNA分离开。 3.复制的原料： 以三磷酸脱氧核苷（dNTP即dATP、dCTP、dGTP、dTTP）为原料。 （二）参与DNA复制的酶类及蛋白因子 复制是在酶催化下的核苷酸聚合过程，需要多种酶和因子的共同参与。 1.DNA拓扑异构酶：拓扑异构酶对DNA分子既能水解又能连接磷酸二酯键，其主要作用是解开DNA超螺旋结构。对DNA分子兼有内切酶和连接酶的功能，使DNA分子的紧密状态变为松弛状态，有利于DNA双链分开。 2.解链酶：解链酶又称解螺旋酶，其作用是解开DNA双链。解链酶能辨认复制的起始点并与之结合，先解开一小段DNA。这一小段单链DNA可作为模板引导DNA新链的合成。在DNA复制过程中，解链酶可沿着模板向着复制方向移动，逐渐解开双链。每解开1个碱基对，需消耗2分子ATP。 3.单链DNA结合蛋白（SSB）：作为模板的DNA总要处于单链状态，因为符合碱基配对，解开的DNA单链又总会有形成双链的倾向，以使分子达到稳定状态和免受细胞内核酸酶的降解。SSB能与解开双螺旋的DNA单链结合，在复制过程中防止单链重新形成双螺旋，保持单链状态以便于进行复制，同时还可以防止单链DNA被核酸酶水解。SSB不象DNA聚合酶那样沿着复制方向向前移动，而是不断结合、脱离的。 4.．引物酶 复制是在一小段RNA引物的基础上加进脱氧核苷酸的。催化引物合成的是一种RNA聚合酶，因它不同于催化转录过程的RNA聚合酶，遂称为引物酶。在复制的起始点，在DNA模板链的指导下，以NTP为底物，按碱基配对原则，引物酶催化RNA引物的合成。 5.DNA聚合酶 DNA聚合酶又称DNA指导的DNA聚合酶（DDDP），其主要作用是 在DNA模板链的指导下，以三磷酸脱氧核苷 （dNTP即dATP、dCTP、dGTP、dTTP）为 底物，按碱基配对原则，将三磷酸脱氧核苷逐个地加到寡聚核苷酸的3′-末端上，并催化核苷酸之间3′，5′-磷酸二酯键的形成，从而将dNTP沿着5′→3′方向聚合成为多核苷酸 。 在原核生物中，目前发现的DNA聚合酶有三种，分别命名为DNA聚合酶Ⅰ（pol Ⅰ），DNA聚合酶Ⅱ（pol Ⅱ），DNA聚合酶Ⅲ（pol Ⅲ），这三种酶都属于具有多种酶活性的多功能酶。 参与DNA复制的主要是pol Ⅲ和pol Ⅰ。 在真核细胞至少有5种DNA聚合酶，分别称为DNA聚合酶α、β、γ、δ、 ε。 DNA聚合酶α和δ是DNA复制时起主要作用的酶，DNA聚合酶β主要参与DNA损伤的修复，DNA聚合酶γ存在于线粒体内，参与线粒体DNA的复制。 6．DNA连接酶：DNA连接酶能连接DNA链3′-OH末端和相邻DNA链的5′-磷酸末端，使二者生成磷酸二酯键，从而把两段相邻的DNA链连接成完整的链，这一反应需消耗ATP。 作用：在有模板指导的条件下，催化2个DNA片段(两片段间的距离为1个3 ,5 -磷酸二酯键的键长)的连接。 原理：在一个DNA片段的3 -OH末端和另一个DNA片段的5-P末端形成3,5-磷酸二酯键，从而实现连接。 特点：原核细胞:需辅助因子NAD+ 真核细胞:不需辅助因子NAD+,但需耗能(ATP) （三）、DNA的生物合成过程 1.复制的起始 DNA复制的起始阶段，由下列两步构成。 （ 1）．解旋解链，形成复制叉： ①由拓扑异构酶和解链酶作用，使DNA的超螺旋及双螺旋结构解开，碱基间氢键断裂，形成两条单链DNA。 ②单链DNA结合蛋白（SSB）四聚体结合在两条单链DNA上，形成复制叉。 （2）．引发体组装和引物合成： ①由解螺旋酶 、引物酶和DNA复制起始区域形成引发体； ②在引物酶的催化下，以DNA为模板，合成一段短的RNA片段，从而获得3端自由羟基（3-OH）。 领头链连续复制而随从链不连续复制，就是复制的半不连续性。 真核细胞：具有多个 起始