碱性工磷酸酶米氏常数的测定.pptVIP

实验十四 碱性磷酸酶米氏常数的测定 一、目的要求 1.学习分光光度法测定的原理和方法 2.学习和掌握米氏常数（Km）及最大反应速度（Vm）的测定原理和方法，测出碱性磷酸酶在以对硝基苯酚磷酸为底物时的Km 和Vm值。 二、原理 酶促反应v-[S]曲线 v [S] 推导出米氏方程为： 其中[S]为底物浓度；v为初速度；Vm为最大反应速度；Km 为米氏常数 米氏常数Km是酶的一个基本特征常数，它包含着酶与底物结合和解离的性质。特别是同一种酶能够作用于几种不同底物时，米氏常数Km往往可以反映出酶与各种底物的亲和力的强弱。 测定Km和Vm，可通过作图法求得。 最常用的Lineweaver-Burk双倒数作图法。这个方法是将米氏方程转化为倒数形式，即： 以1/v对1/[S]作图，可得一条直线 1/v 1/Vm