生检电六泳、酶.pptVIP

电泳迁移率是反映带电粒子在单位电场强度作用下的移动速度。 即带电粒子在每厘米降为1伏特（V/cm）的电场强度下每秒钟内移动的厘米数（cm/s）。 μ=V/E=(1/t)/E=1/tE μ为电泳迁移率， V为粒子移动的速度（cm/s），即1/t E为电场强度（V/cm） T为时间（秒） 1为移动的距离（cm） μ为蛋白质电泳的特征常数 μ的单位为cm·s·v 电泳速度（V）与其电量（Q）和电场强度成正比，而与粒子的半径（r）和介质粘度（η）成反比，即 V=（QE/6πrη）/E这样 μ=V/E=Q/ 6πrη 常用的区带电泳 滤纸电泳 醋酸纤维薄膜电泳 琼脂糖凝胶电泳 聚丙烯酰胺凝胶电泳 影响电泳的因素 1.电场强度 2.缓冲液 pH 组成成分 离子强度 * * 溶液中带电粒子在直流电场中向电性相反电极移动的现象称为电泳。 电 泳 利用电泳现象对物质进行分离的技术称为电泳技术。 电泳技术 根据Stoke定律 人血清蛋白的等电点和电泳迁移率 蛋白质 等电点 电泳迁移率cm2.s-1.v-1 白蛋白 4.84 5.9×10-5  球蛋白 5.06 5.1×10-5 球蛋白 5.06 4.1×10-5  球蛋白 5.12 2.8×10-5  球蛋白 6.85~7.30 1.0×10-5 1、根据被分离的样品多少分为 分析电泳 制备电泳2、根据电泳时电压的高低分为 高压电泳 常压电泳 电泳的分类 3、根据是否使用支持物分为 自由电泳 区带电泳4、根据电泳系统是否均一分为 连续电泳 不连续电泳 电 泳 仪 由直流电源和电泳槽两部分组成。一、直流电源 一般由交流电经过整流获得 恒压电源 恒流电源 恒功电源 二、电泳槽 盖 电极及电极室 支架 3.支持物 吸附作用 电渗作用 4.虹吸作用 5.样品 不同的蛋白质具有不同的等电点，利用具有线性pH梯度的电泳介质来分离等电点不同的蛋白质，这种电泳技术称为等电聚焦电泳。 进行等电聚焦电泳的条件 1.有一个在电泳条件下基本稳定的、 重复性良好的pH梯度。2.有一个抗对流的电泳材料。3.电泳后有适当的方法来鉴定 分离的区带。 双向电泳是先把样品从一个方向进行电泳分离，接着再与其成90°方向进行第二次电泳分离。 第一次电泳以其电荷性质为基础；第二次电泳则按分子量不同进行分离。 转移电泳是将凝胶电泳的高分辩率与放射标记或酶标记等免疫化学方法的高灵敏度结合起来的电泳技术。 1.用凝胶电泳分离蛋白质或核酸 2.用电泳的方法将已分离的蛋白质或 核酸转移到硝酸纤维膜或重氮苄氨 基甲基纸上。  3.鉴定纸上的蛋白质或核酸 其方法是： 酶的活性是指酶的催化能力的大小，即酶促反应速度的快慢。在规定条件下，单位时间内底物减少的量或产物生成的量来表示。 酶活性的单位是指在特定的条件下，使酶促反应达到某一速度所需要的酶量。 1.惯用单位 由方法的作者自己规定在某特定 条件下生成一定量的产物为一个单位。2.国际单位（IU） 在规定的实验条件下，每分钟催 化1μmol底物发生反应的酶量。3.Katal 1 Katal是指在最适宜的条件下，  每秒钟催化1mol底物发生反应的酶量。 酶的比活性是指单位质量（mg）的蛋白质所具有某种酶的活性。  活性单位/mg蛋白 比活性是衡量酶纯度的一个指标。 酶活性测定的方法： 1.终点法（又称二点法、固定时