鸭瘟病毒荧光定量pcr检测方条法的建立及其强弱毒株ul2基因差异分析.docxVIP

本课题得到山东省农业科学院青年科研基金(2015YQN54)和 本课题得到山东省农业科学院青年科研基 金(2015YQN54)和 山东省现代农业产业技术体系项目 (SDAIT一1 3-0 1 1-0 1)资助 万方数据 IIIII IIIII III IIIIIIII Iltl III IIIl 关于学位论文原创性和使用授权的声一Y一2786926 本人所呈交的学位论文，是在导师指导下，独立进行科学研究所取得 的成果。对在论文研究期间给予指导、帮助和做出重要贡献的个人或集体， 均在文中明确说明。本声明的法律责任由本人承担。 本人完全了解山东农业大学有关保留和使用学位论文的规定，同意学 校保留和按要求向国家有关部门或机构送交论文纸质本和电子版，允许论 文被查阅和借阅。本人授权山东农业大学可以将本学位论文的全部或部分 内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存 论文和汇编本学位论文。 保密论文在解密后应遵守此规定。 论文作者签名： 导师签名： 日 期：垄』三：!：星 万方数据 符号说明英文缩写 符号说明 英文缩写 英文全称 中文名称 AMP Ampicillin 氨苄青霉素 bp base pairs 碱基对 Ct Threshold cycle 达到阈值的循环数 FQ—PCR Real-time flourescent quantita tive PCR 实时荧光定量PCR DP Duck plagu 鸭瘟、 DVE Duck virus enteritis 鸭病毒性肠炎 DEV Duck enteritis virus 鸭肠炎病毒 dNTPs Deoxynucleoside triphosphate 三磷酸脱氧核苷 DNA Deoxyribonucleic acid 脱氧核糖核酸 ELISA enzyme linked immunosorbent assay 酶联免疫吸附试验 EB Ethidium bromide 溴化乙锭 E．coli Escherichia coli 大肠杆菌 EDTA Ethylene diamine tetraacetic acid 乙二胺四乙酸 LAMP Loop—mediated isothermal amplification 环介导等温扩增 LB lysogeny broth 细菌基础培养基 mL milliliter 毫升 mIn minutes 分钟 OD Optical density 吸光度 PBS Phosphate—buffered saline 磷酸盐缓冲液 PCR Polymerase chain reaction 聚合酶链式反应 rpm Revolutions per minute 转／分钟 RNA 融bonueleic acid 核糖核酸 SPF Specific pathogen Free 无特定病原 SDS Sodium dodecyl sULphate 十二烷基硫酸钠 S second 秒 mln minute 分钟 h hour 小时 万方数据 d d Day 天 Thermus aquaticu 水生热栖酶 嘲E璺 Melting temperature 解链温度 unit’ 单位 n Nanogram per milliliter 纳克／毫升 u咖砒几 Mole per liter 摩尔|诗 鹕 milligram 毫克 microgram 微克 岭灿 microliter 微升 万方数据 目录中文摘要 目录 中文摘要 I Abstract II 前言 ．1 1．1鸭病毒性肠炎研究进展 ．1 1．1．1历．史 ．1 1．1．2病原学 1 1．1-3分子生物学 。2 1．1．4流行病学 ．．4 1．1．5诊断方法 一5 1．1．6免疫预防 ．．8 1．2荧光定量PCR技术研究进展 ．10 1．2．1实时荧光定量PCR的分类 。10 1．2．2实时荧光定量PCR的几个重要概念 一12 材料与方法 。13 2．1材料 13 2．1．1鸭胚与毒株 13 2．1．2主要仪器 13 2．1．3主要试剂 13 2．1．4主要溶液及培养基的配制 14 2．2方法 ．．15 2．2．1鸭瘟病毒高青株的分离鉴定 15 2．2．2鸭瘟病毒高青分离株UL2基因的克隆与序列分析 18 2．2．3鸭瘟病毒SYBR Green I荧光定量PCR检测方法的建立 21 结果与分析 ．．25 3．1鸭瘟病毒高青株的分离鉴定 25 3．1．1细菌分离结果 25 3．1．2病毒分离结果 25 3．1．3动物回归试验