基因工一程复习提纲-微软雅黑v113.docVIP

PAGE \* MERGEFORMAT16 基因工程复习提纲 什么是基因？ 基因：是DNA分子中含有特定遗传信息的一段核苷酸序列，是遗传物质的最小功能单位。种类：编码蛋白的基因、只转录而无翻译功能的基因（tRNA，rRNA）、不转录的基因。 基因工程的诞生 基因工程诞生于1973年。 1973－1974年，美国科学家科恩等以大肠杆菌为材料，成功地进行了三次基因工程试验。试验结果证明，用基因工程可以打破不同物种间在亿万年中形成的天然屏障，任何不同种类生物的基因都有可能通过基因工程技术而组合到一起。人类进入了激动人心的基因工程时代。 第一个实现DNA重组的人－Berg 1972年，Berg用E.coRⅠ切割SV40DNA和λphage DNA，经过连接组成重组的DNA分子。Berg是第一个实现DNA重组的人。 第一个取得基因工程成功的人－Cohen 1973年，Cohen Group将E.coli的tetr质粒psclol和nersrR6-3质粒进行体外限制酶切割，并连接成一个新的质粒，转化E.coli，在含四环素和新霉素的平板上筛选出了tetrNer的转化子,实现了细菌遗传性状的转移。这是基因工程史上的第一个克隆并取得成功的例子，这一年被定为基因工程诞生的元年。 Gohen Group第一次实现了细菌遗传性状转移示意图 理论上的三大发现 （1）40年代发现了生物的遗传物质是DNA。 （2）50年代搞清楚了DNA的双螺旋结构和半保留复制机理。 （3）60年代确定了遗传信息的传递方式。 2、技术上的三大发明 （1）限制性核酸内切酶（restriction enzymes）的发现 20世纪40－60年代，科学家们就为基因工程设计了美好的蓝图，但是面对庞大的dsDNA束手无策，无从下手把它切成单个基因片断。 当时的酶学知识已有相当的发展，但是没有一个已发现的酶能完成这样的使命。 1970年，Smith和Wilcox在流感嗜血杆菌（Haemophilus inffuenzae）分离纯化了HindⅡ，取得了突破，打破了基因工程的禁锢，迎来了改造生物的春天，为基因工程奠定了最为重要的技术基础。 （2）DNA连接酶（ligase）的发现 （3）基因工程载体（vector）的发现 有了切割与缝合（ligase）基因DNA的工具，还得有一个“车子”将重组DNA送到宿主细胞中去。 1946年起，Lederberg开展了细菌性因子（F因子）的研究。50-60年代相继发现了R因子（抗药因子），CoE(大肠杆菌因子)等质粒。 直到1973年,Cohen开始将质粒作为基因工程载体使用（至今一直是基因工程最重要最广泛使用的载体）。这是基因工程的第二个技术准备。 基因工程的定义及三大基本元件。 定义：基因工程是指重组DNA技术的产业化设计与应用，包括上游技术和下游技术两大组成部分。上游技术指的是基因重组、克隆和表达的设计与构建（即重组DNA技术）；而下游技术则涉及到基因工程菌或细胞的大规模培养以及基因产物的分离纯化过程。 （基因工程的基本特点是，分子水平操作，细胞水平表达） （重组DNA技术——又称为分子克隆技术，是指将一种生物体（供体）的基因与载体在体外进行拼接重组，然后转入另一种生物体（受体）内，使之按照人们的意愿稳定遗传并表达出新产物或新性状的DNA体外操作程序。） 供体、受体、载体是重组DNA技术的三大基本元件。 基因工程的研究内容 (1) 从生物有机体复杂的基因组中，分离出带有目的基因的DNA片段； (2) 在体外，将带有目的基因的DNA片段连接到能够自我复制并具有选择标记的载体分子上，形成重组DNA分子； (3) 将重组DNA分子引入（转）到受体细胞(亦称宿主细胞或寄主细胞)； (4) 从大量的细胞繁殖菌落中，筛选出具有重组DNA分子的细胞克隆； (5) 将目的基因克隆到表达载体上，导入寄主细胞，使之在新的遗传背景下实现功能表达，产生出所需要的物质。 基因工程的技术准备及技术支撑。 ①核酸凝胶电泳技术；②核酸分子连接技术；③细菌转化技术；④DNA序列分析技术；⑤寡核苷酸合成技术；⑥基因定点突变技术；⑦聚合酶链式反应（PCR）技术。 基因工程的基本用途 a．分离、扩增、鉴定、研究、整理生物信息资源；b.大规模生产生物活性物质； c.设计、构建生物的新性状甚至新物种 核酸酶的分类 核酸酶——能够将核苷酸链的磷酸二酯键切断的酶，属于水解酶。 根据核酸底物分——RNA酶（Rnase）；DNA酶（Dnase）；底物非专一性核酸酶 根据作用方式分——内切核酸酶；外切核酸酶 根据对底物碱基专一性分——碱基专一性核酸酶（切割部位的碱基序列高度专一性）；非碱基专一性核酸酶（切割部位的碱基序列随机性） 细菌中的防卫系统：限制与修饰现象。