第十一章hpl字c-1.pptxVIP

高效液相色谱法;第一节 绪论; LC HPLC 柱径 1 ～ 5cm 2 ～ 10mm 颗粒 75 ～ 600μm 5 ～ 50 μm 压力 常压 高压 tR 1 ～ 20h 1h内 n 2 ～ 50 105 / 米 用途 初步分离 高效分离、高灵敏度定量 装置 非仪器化 精密仪器，自动化, 智能化 ;极性增加;第二节 高效液相色谱仪简介;1、贮液罐和过滤器：;离线脱气：抽真空脱气、超声、吹氦 在线真空脱气装置;3、高压输液泵：恒流泵、恒压泵;单柱塞往复式恒流泵;4、梯度洗脱装置：;二、 进样系统; 使用定量环的定量：六通阀进样器的进样方式有部分装液法和完全装液法两种。 使用部分装液法进样时，进样量最多为定量环体积的75%，如20μL的定量环最多进样15μL的样品，并且要求每次进样体积准确、相同； 使用完全装液法进样时，进样量最少为定量环体积的3至5倍，即20μL的定量环最少进样60至100μL的样品，这样才能完全置换样品定量环内残留的溶液，达到所要求的精密度及重现性。 ;自动进样器; ;色谱柱 结构：柱管多用不锈钢制成，色谱柱两端的柱接头内装有 筛板，目的是防止填料漏出。 填料： 粒度多为0.2～20 μm(以5～10μm居多) 。 发展趋势是减小填料粒度和柱径以提高柱效。 规格：常规分析柱(常量柱) 内径2～5mm(常用4.6mm， 3.9mm)，柱长10～30cm (15cm，25cm居多） ;;四、 检测系统;第三节 HPLC的固定相和流动相; 2. 全多孔微粒型（使用广泛） 如2-10 μm全多孔球形微粒硅胶，其比表面积为200-500 m2/g，平均孔径5-100 nm。 此类固定相由于颗粒很细，孔仍然较浅，传质速度快，特别适合复杂混合物的分离及痕量分析。 ; （二）液液分配色谱法固定相—化学键合相 ? 化学键合相，用化学键把固定液键合到载体表面的官能团上，非常稳定，在使用中不易流失。根据制备方法分为： 1. 硅酸酯键合固定相;特点：性质稳定、不易吸水、耐有机溶剂，70℃以下，pH2～8范围内使用。 ;二、流动相 ; 流动相的物化性质要与使用的检测器相适应。如使用 UV 检测器，最好使用对紫外吸收较低的溶剂配制。 流动相沸点不要太低，否则容易产生气泡，导致实验无法 正常进行。 在流动相配制好后，一定要进行脱气。除去溶解在流动相 中的微量气体既有利于检测，还可以防止流动相中的微量 氧与样品发生作用。 尽量使用高纯度试剂作流动相，防止微量杂质长期累积损坏色谱柱和使检测器噪声增加。 ; 溶剂强度参数：表示溶剂对化合物洗脱能力的一种指标。定义是溶剂分子在单位吸附剂表面上的吸附自由能，表征溶剂分子对吸附剂的亲和程度。越大表示洗脱能力越强。 溶解度参数：表示1mol理想气体冷却转变成液体时释放的凝聚能与液体摩尔体积比值的平方根。对非极性化合物，其聚合能很小，因此溶解度参数小，极性化合物则大。因此，溶解度参数可在液液分配色谱中作为衡量溶剂极性强度的指标。 极性参数：表示每种溶剂与乙醇、对二氧六环和硝基甲烷三种极性物质相互作用的量度。反映了每种溶剂洗脱强度的大小。 三者以相同的趋向增大或减小，通常仅选择一种参数表示溶剂的极性大小。;常用溶剂的极性顺序： 水(最大) 甲酰胺 乙腈 甲醇 乙醇 丙醇 丙酮 二氧六环 四氢呋喃 甲乙酮 正丁醇 乙酸乙酯 乙醚 异丙醚 二氯甲烷氯仿溴乙烷苯 四氯化碳二硫化碳环己烷己烷煤油(最小) 3. 混合溶剂 4.溶剂的选择性分组 在溶剂选择性分组的三角形坐标图中（p359），常用的溶剂可分为8个选择性不同的特征组，处于同一组中的溶剂具有相似的极性。; 正相柱：固定相通常为硅胶以及其他具有极性官能团，如