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实验三 线粒体和液泡系的 超活染色与观察 一 实验目的 1 观察动、植物活细胞内线粒体、液泡的 形态、数量和分布 2 了解细胞和细胞器的超活染色技术。 二 实验原理 活体染色是指对生活有机体的细胞或组织能着色但又无毒的一种染色方法。 活体染色可用来研究生活状态下的细胞形态结构和生理、病理状态。 根据染色剂性质和染色方法不同，分为体内活染和体外活染。 活体染色之所以能固定、堆积在细胞内某些特殊的部分，主要是染料的“电化学”特性起重要作用。碱性燃料的胶粒表面带阳离子，酸性染料的胶粒表面带有阴离子，而被染的部分本身也是具有阴离子或阳离子，这样，他们彼此就发生了吸引作用。但不是任何染料都可以作为活体染色剂之用，应选择那些对细胞无毒性或毒性极小的染料，而且总要配成稀淡的溶液来使用。一般是以碱性染料最为适用，可能因为它具有溶解在类脂质的特性，易于被细胞吸收，Janus green B和中性红两种碱性染料是活体染色剂中最重要的染料，对于线粒体和液泡系的染色各有专一性。 詹纳斯绿Ｂ可专一性地对对线粒体进行活染,这是由于线粒体内的细胞色素氧化酶系的作用，使染料始终保持氧化状态(即有色状态),呈蓝绿色。 中性红对液泡系的染色具有专一性，将活细胞中的液泡系染成红色。 三 实验用品 1 ．器材： 显微镜、恒温水浴锅、、剪刀、镊子、解剖刀、载玻片、盖玻片、吸管、牙签、吸水纸 2 ．试剂： Ringer液、1/5000詹纳斯绿Ｂ、1/3000中性红 3 ．材料： 人口腔上皮细胞 洋葱鳞茎内表皮细胞 小麦或黄豆幼根根尖 四 实验方法 一 线粒体的超活染色与观察 詹纳斯绿B能专一对线粒体进行超活染色，呈蓝绿色。 1 人口腔粘膜上皮细胞线粒体 的超活染色观察 载玻片→ 37℃水浴锅的金属板→滴两滴詹纳斯绿B染液 牙签→从口腔粘膜刮取上皮细胞→放入载玻片染液→染色10-15分钟→盖上盖玻片→观察 低倍镜→平展的口腔上皮细胞→高倍镜→颗粒或短棒状线粒体 洋葱鳞茎表皮细胞线粒体的 超活染色 载玻片→滴一滴詹纳斯绿B染液→撕取一小片洋葱鳞茎内表皮→染色10-15分钟 吸去染液→加一滴Ringer液→盖上盖玻片→观察 二 液泡系的超活染色与观察 中性红对液泡系的染色具有专一性，将活细胞中的液泡系染成红色。 小麦液泡系的超活染色与观察 小麦根尖细胞液泡系的中性红染色观察 双面刀片→小麦或黄豆幼苗根尖→切一纵切面→中性红染色5-10分钟 吸去染液→加一滴Ringer液→盖上盖玻片→镊子轻轻下压盖玻片→观察 五 作业 1 ．画出你所观察到的线粒体和液泡的图像. 2 ．总结实验成功或失败的原因. * *