地衣芽胞杆菌中过表达丙酮酸羧化酶提高杆菌肽产量.PDFVIP

第４１卷第１期 湖北大学学报(自然科学版) Ｖｏｌ.４１　 Ｎｏ.１　 ２０１９年１月 Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｈｕｂｅｉ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ(Ｎａｔｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ) Ｊａｎ. ꎬ２０１９　 文章编号:１０００ ２３７５(２０１９)０１ ００１５ ０７ 地衣芽胞杆菌中过表达丙酮酸羧化酶 提高杆菌肽产量 刘钊远ꎬ余文莉ꎬ王勤ꎬ杨勇 (湖北大学生命科学学院ꎬ湖北 武汉４３００６２) 摘要:拟通过过表达丙酮酸羧化酶基因ｐｙｃＡꎬ获得杆菌肽高产菌株ꎬ提高杆菌肽产量.构建ｐｙｃＡ 基因过表达工程菌 株ＤＷ２/ ｐＨＹ￣ｐｙｃＡꎬ以ｐＨＹ３００ｐｌｋ转化菌株 ＤＷ２/ ３００ 为对照.经过发酵研究验证ꎬＤＷ２/ ｐＨＹ￣ｐｙｃＡ 杆菌肽效价为７６７.７ Ｕ/ ｍＬꎬ比ＤＷ２/ ３００效价提高了１４.５％ꎬ另外在发酵过程中ＤＷ２/ ｐＨＹ￣ｐｙｃＡ 的生物量有所提高ꎬ且胞内草酰乙酸的含量提 高了１８.６％.经过对ＤＷ２/ ｐＨＹ￣ｐｙｃＡ 的基因相对转录水平分析后发现ꎬＤＷ２/ ｐＨＹ￣ｐｙｃＡ 中ＴＣＡ循环合成酶基因的转录水 平均有所增加ꎬ该结果表明在ｐｙｃＡ基因过表达菌株中ꎬＴＣＡ循环的代谢较对照菌株有所提高.因此ꎬ通过过表达ｐｙｃＡꎬ可 以增强ＴＣＡ 回补反应ꎬ进而提高草酰乙酸的含量和强化ＴＣＡ循环ꎬ最终提高了杆菌肽组成氨基酸的供给ꎬ可以实现杆菌 肽的高产. 关键词:杆菌肽ꎻ地衣芽胞杆菌ꎻ丙酮酸羧化酶 中图分类号:Ｑ８１２　 　 文献标志码:Ａ　 　 ＤＯＩ:１０.３９６９/ ｊ.ｉｓｓｎ.１０００￣２３７５.２０１９.０１.００４ Ｅｎｈａｎｃｅｄ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ｂａｃｉｔｒａｃｉｎ ｂｙ ｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇ ｔｈｅ ｐｙｒｕｖａｔｅ ｃａｒｂｏｘｙｌａｓｅ ｇｅｎｅｐｙｃＡ ｉｎＢａｃｉｌｌｕｓ Ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ ＤＷ２ ＬＩＵ ＺｈａｏｙｕａｎꎬＹＵ ＷｅｎｌｉꎬＷＡＮＧ ＱｉｎꎬＹＡＮＧ Ｙｏｎｇ (Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｌｉｆｅ ＳｃｉｅｎｃｅｓꎬＨｕｂｅｉ ＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙꎬＷｕｈａｎ４３００６２ꎬＣｈｉｎａ) Ａｂｓｔｒａｃｔ:Ｔｈｅ ｄｏｄｅｃａｐｅｐｔｉｄｅ ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃ ｂａｃｉｔｒａｃｉｎꎬｐｒｏｄｕｃｅｄ ｂｙ ｓｅｖｅｒａｌ ｓｔｒａｉｎｓ ｏｆ Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓ ａｎｄＢａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓꎬ ｉｓ ｗｉｄｅｌｙ ｕｓｅｄ ａｓ ａｎ ａｎｔｉｂａｃｔｅｒｉａｌ ａｎｉｍａｌ ｆｅｅｄ ａｄｄｉｔｉｖｅ. Ｉｎ ｔｈｉｓ ｓｔｕｄｙꎬ ｔｈｅ ｐｙｒｕｖａｔｅ ｃａｒｂｏｘｙｌａｓｅ ｇｅｎｅｐｙｃＡ ｗａｓ ｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｅｄ ｔｏ ｅｎｈａｎｃｅ ｔｈｅ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ｂａｃｉｔｒａｃｉｎ. Ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ ｓｔｒａｉｎ ＤＷ２/ ｐＨＹ￣ｐｙｃＡ ａｎｄ ｔｈｅ ｃｏｎｔｒｏｌ ｓｔｒａｉｎ ＤＷ２/ ３００ ｗｅｒｅ ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｅｄ. Ｃｏｍｐａｒｅｄ ｔｏ ＤＷ２/ ３００ꎬ ｔｈｅ ｂａｃｉｔｒａｃｉｎ ｔｉｔｅｒ (７６７.７ Ｕ/ ｍＬ) ａｎｄ ｔｈｅ ｂｉｏｍａｓｓ ｏｆ ＤＷ２/ ｐＨＹ￣ｐｙｃＡ ｗａｓ ｉｎｃｒｅａｓｅｄ ｂｙ １４.５％ ａｎｄ ３３％ ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ. Ｔｈｅｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｏｆ ｏｘａｌｏａｃｅｔａｔｅｉｎＤＷ２/ ｐＨＹ￣ｐｙｃＡ ｗａｓ１８.６％ ｈｉｇｈｅｒｔｈａｎｔｈａｔｉｎ ＤＷ２/ ３００. Ｔｈｅ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｌｅｖｅｌｓ ｏｆ ｏｔｈｅｒ ｇｅｎｅｓ ｉｎ ＴＣＡ ｃｙｃｌｅ ｗｅｒｅ ａｌｓｏ ｉｎｃｒｅａｓｅｄ ａｆｔｅｒ ｐｙｃＡ ｇｅｎｅ ｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ. ＴｈｅｓｅｒｅｓｕｌｔｓｉｎｄｉｃａｔｅｄｔｈａｔｔｈｅｃａｒｂｏｎｆｌｕｘｔｏｗａｒｄｓＴＣＡｃｙｃｌｅｗａｓｉｎｃｒｅａｓｅｄｂｙｏｖｅｒｅ