类受体激酶sobir1互作蛋白的鉴定及功能分析-园艺学;蔬菜学专业论文.docxVIP

优秀毕业论文 精品参考文献资料 Classified Classified Index： Code 10224 Confidential(yes／no)：no NO．：110140 Dissertation for the Doctoral Degree Identification and Characterization of Receptor Like Kinase SOBIRl Interactors Candidate：Bi Guozhi S pervisor：Researcher XU xmngvang Degree Category：Doctor ofAgriculture College：Northeast Agricultural University First level discipline：Horticulture Second level discipline：Olericulture Harbin China June 2015 万方数据 目 目 录 目录 摘亘 IYIIIIIIl2IIIIIPl7Ullll7I JIIIl2lllJIl2IIIIIII鞘llll 摘要 ：．二二一-．一：●。V 英文摘要 ．．III 1前言 1 1．1研究目的意义、研究内容、实验设计 1 1．1．1本研究的目的意义 1 1．1．2研究内容 2 1．1．3试验设计 2 1．2文献综述 ．3 1．2．1番茄抗叶霉病的研究进展 ．3 1．2．2膜受体蛋白研究进展 7 1．2．3 SOBIRl研究进展 ．． ．10 1．2．4互作蛋白鉴定方法的研究进展 一1 1 2材料与方法 ．15 2．1实验材料 1 5 2．1．1植物材料 ．15 2．1．2菌株和质粒 ．．15 2．2方法 ．15 2．2．1植物的无菌培养与栽培 1 5 2．2．2载体构建的一般方法 16 2．2．3各种植物表达载体的构建 19 2．2．4酵母杂交筛选cDNA文库 20 2．2．5转基因植物获得 22 2．2．6植物总蛋白的提取及免疫印迹共沉淀 23 2．2．7质谱样品制备 24 2．2．8总RNA的提取 ．24 2．2．9 HR检测和Cladosporium fulvum接种测定 ．25 2．3试剂及缓冲液配方 25 2．3．1常用分子生物学试剂配方 25 2．3．2常用缓冲液配方 27 2．3．3常用培养基配方 28 3结果与分析 ．31 3．1 SOBIRl蛋白序列分析 31 3．1．1 SOBIRl蛋白进化树分析 ．3l 3．1．2 SOBIRl蛋白结构域分析 ．31 3．1．3 SOBIRl同源蛋白跨膜区分析 ．32 万方数据 东北农业大学农学博士学位论文3 东北农业大学农学博士学位论文 3．2通过酵母杂交技术鉴定S1SOBIRl互作蛋白 33 3．2．1酵母能稳定表达SISOBIRl．kinaSe domain(KD)和SISOBIRl．RD／N．kinase domain33 3．2．2自激活检测 ．．34 3．2．3毒性检测 ．．35 3．2．4酵母杂交效率检测 36 3．2．5 PCR及酶切筛选重复序列 36 3．2．6测序结果 36 3．2．7酵母共转化 38 3．2．8候选基因功能预测 39 3．3酵母杂交候选基因功能验证 ．39 3．3．1 VDAC功能验证 39 3．3．2 SAPI 8功能验证 41 3．4通过质谱技术鉴定S1SOBIRl互作蛋白 42 3．4．1植物材料准备 42 3．4．2质谱样品准备 ．．47 3．4．3质谱结果与分析 5l 3．4．4候选基因生物信息学分析 57 3．5质谱候选基因功能验证 ．59 3．5．1候选基因表达量分析 59 3．5．2功能验证 ．60 4讨论 ．64 4．1 SOBIRl进化保守 ．64 4．2酵母杂交及免疫沉淀假阳性 ．65 4．3 SOBIRl自激活 ．66 4．4 SOBIRl下游途径 ．67 4．5假阳性基因功能讨论 67 4．6主要创新点 68 4．7今后研究的方向与目标 ．68 5结论 ．．： ．70 致谢 ．．71 参考文献 ．．72 攻读博士学位期间发表的学术论文 83 II 万方数据 CONTENTSCONTENTS CONTENTS CONTENTS Abstract in Chinese I Abstract in English III 1．IntrOduction ．．1 1．1 Purpose and objectives ofthis research ．．1 1．1．1 The research purpose l 1．1．2 The research content ：1 1．1．3 The resear