乙型肝炎病毒肿瘤蛋白细胞靶标hbxip负向调控toll样受体信号转导的机阳中制研究.docx

杭州师范大学硕士学位论文致谢 杭州师范大学硕士学位论文 致谢 时光匆匆，本以为漫长的三年在突然间接近尾声。三年的研究生学-7是我人 生中的一笔重要财富，怀念过去的点点滴滴，感谢这三年的美好时光，在这三年 中，我没有后悔当初的选择，学会了更加勇敢，积极，自信的面对将来的生活， 完成了一次蜕变。 首先我要感谢我的导师史丽云教授。是教授带我进入了科研领域，让我完成 从药学到免疫学的转变，接触到一个丰富多彩的科学研究领域。教授对待科研一 丝不苟，教会我勤恳务实，不畏困难的科研态度，那饱满的工作热情和勇攀高峰 的气质，一直激励我们不断前进。三年时间，教授不仅仅教会我科学研究，实验 技术，训练我的科学实验思维，还在生活上给予我无私的帮助，教会我为人处世 的道理。教授在学生身上倾注了太多的心血、时间和精力。对此，我十分的感激， 三年时间虽然如此短暂，但您对我的帮助和教育将是我一生的宝贵财富。 回首三年在实验室的时光，我感受到一个富有朝气，富有凝聚力的优秀团队。 研究生的学-7和工作绝大部分时间都在实验室度过，和老师同学的朝夕相处中感 觉实验室就像一个大家庭，温暖而充满欢笑，大家一起有过汗水有过泪水。在这 里，我要特别感谢赵冬久老师，康艳华老师和张航老师，感谢他们在实验和课题 中给予我的指导和帮助，感谢王丹老师，朴正浩老师，王欢欢老师，卢哲老师， 有了他们的帮助，我的课题才能顺利进行下去。同时也感谢医学实验中心的潘慧 娟老师和尹红萍老师提供的技术支持，感谢生命科学研究院的王颖佳老师的帮助， 谢谢各位老师! 感谢实验室中的兄弟姐妹，大家在一起的辛苦和欢乐都是我人生中最珍视的， 三年的时间不只学会了实验技术，更获得了珍贵的友谊。感谢王璀里师兄，王妍 师姐，毛韵师姐，张强中师兄，是师兄师姐们教会我各项实验操作技能，你们不 仅在实验上帮助我，在生活中也关心我，让我获得了很多美好和快乐。感谢卓诗 勤同学，丁弋娜同学，王松学同学，杨浩同学，金素凤师妹，赵玉芳师妹，王冰 师妹等兄弟姐妹的帮助和关心。 更重要的，我还要感谢我的家人，父母的期盼是我前进的动力，他们默默的 支持和无微不至的爱护让我能顺利完成学业，他们的鼓励让我走到今天。 希望我能在理想的道路上走的更远，闯荡出自己的天空! 万方数据 杭州师范大学硕士学位论文最后，感谢在百忙之中抽出时间评审我的毕业论文的各位专家和参与答辩的 杭州师范大学硕士学位论文 最后，感谢在百忙之中抽出时间评审我的毕业论文的各位专家和参与答辩的 所有老师，谢谢! 万方数据 杭州师范大学硕士学位论文中文摘要 杭州师范大学硕士学位论文 中文摘要 目的： 研究HBXIP在LPS诱导的TLR4信号转导通路中发挥的作用；阐明HBXIP 在TLR4转运和降解过程中的重要作用及其机制。 方法： 1．构建pcmv—mHBXIP真核表达质粒，并测序鉴定。 2．定量PCR与Western blot的方法检测HBXIP的表达规律，分析LPS刺激下 HBXIP的表达变化。 3．以小鼠巨噬细胞系Raw264．7为细胞模型，建立HBXIP高表达和表达抑制的 稳定转染细胞系，用定量PCR和Western blot的方法鉴定HBXIP高表达和表 达抑制的稳定转染细胞系。 4．用定量PCR和ELISA方法检测HBXIP高表达的Raw264．7细胞系以及HBXIP 表达抑制的Raw264．7细胞系中IL-6、IL—lp、TNF-Q、IFN—p等炎症因子的 表达情况；用Western blot的方法检测LPS诱导下NF．K B信号通路以及 MAPKs信号通路的变化(包括IKK Q／13、I B a、p65、JNK、Erk、p38、IRF3 等)。 5．通过免疫共沉淀的方法，检测HBXIP和TLR4的直接作用；通过FACS分析 巨噬细胞表面TLR4的表达变化；通过Western blot的方法检测TLR4蛋白水 平，用定量PCR检测TLR4的转录水平变化。 6．通过Western blot的方法检测HBXIP高表达的Raw264．7细胞系以及HBXIP 表达抑制的Raw264．7细胞系中LC3II的表达情况以及mTOR信号通路的变 化。 7．采用流式细胞术分析HBXIP对巨噬细胞溶酶体数量以及溶酶体pH的影响。 8．利用激光共聚焦，定位分析HBXIP高表达的Raw264．7细胞系以及HBXIP 表达抑制的Raw264．7细胞系中TLR4与溶酶体以及自噬小体的共定位。 9．Western blot方法检测HBXIP对巨噬细胞中转录因子EB(transcription factor EB，TEFB)的磷酸化水平的影响；利用激光共聚焦分析HBXIP对TFEB核 转位的影响。 10．电镜观察HBXIP高表达和表达抑制的稳定转染细胞系中溶酶体的形态。 万方数据 杭州师范大学