第7章第3节动号物克隆.pptVIP

第三节 动物克隆克隆(clone)是指通过无性繁殖的手段，从一个动物细胞获得遗传背景相同的细胞群或个体群的过程。获得的这些细胞叫克隆细胞，个体群称为克隆动物(cloned animal)。广义上的动物克隆就是指动物的无性繁殖(asexual reproduction)，即用无性繁殖的手段,由单一个体产生外形、性能和基因型完全一致的多个动物。 1.1 克隆技术产生的历史背景 1885年，Freiberg大学的动物学教授August Weismann提出了一种新的遗传学理论，他设想受精卵分裂后的每个子细胞只继承了母细胞一半的信息，以此来解释为什么来源于一个受精卵的机体细胞会变成各种各样的特化状态。 胚胎学家William Roux宣布他用试验验证了Weismann的遗传学理论。他用一个热针破坏掉2-细胞期青蛙胚胎中的一个卵裂球，最后发育成一半的青蛙。 Hans Adolf Edward Dreisch企图在海胆上重复上述实验时，却得到完全相反的结果。他把2-细胞胚的两个卵裂球分开，结果分别发育成完整的海胆个体。 1.2 克隆技术的创立 1928年，Hans Spermann在蜥蜴上完成了人类历史上第一次核移植实验。他首先用一根头发把一个新受精卵勒住，将细胞核、细胞质各分一边，两部分之间的没有任何交流。拥有核有一半继续分裂增殖，等到16-细胞期时，松开头发套，让其中一个卵裂球细胞的核流入另一侧细胞质中。最后再把这两部分分开。结果发现，这个新建的细胞还能进一步发育成胚胎。这说明早期胚胎卵裂球细胞中，仍拥有全部的遗传信息，每个细胞都有指导发育成新个体的潜能。 1.3 与克隆技术有关的重大成果 1952年，Robert Briggs和Thomas J.King用核移植方法克隆出了北美豹蛙的蝌蚪。 1953年，英国生物物理学家Francis Crick和美国生化学家James Watson共同发现了DNA结构。 1958年，Cornell大学生物学家F.E.Steward成功的用一个胡萝卜细胞培育出了完整的植株。证明植物细胞的全能性。 1961年，Francis Crick和Sidney Brenner发现，每三个核苷酸碱基序列组成一个密码，特异的针对一个氨基酸。这一成果敲开了现代遗传学的开门。 1991年，Westhusin等首先报道继代克隆胚胎可以正常发育到囊胚。1993年，Stice和Keefer获得了第一、第二、第三代继代克隆牛的出生。1995年，成勇等获得第二代克隆山羊。1998年张涌等报道了第一至第五代克隆山羊的成功。1995年，Roslin Ian 研究所的Wilmut Keith和Campbell用培养的胚盘细胞成功的克隆出了两只绵羊，表明已经有组织分化的细胞仍具有发育的全能性。1996年，Wilmut和Campell等成功地从培养的绵羊乳腺细胞得到第一只成年体细胞克隆羊（Dolly）。随后几年间，体细胞克隆牛（Kono,1998;Wells,1999），小鼠（Wakayama,1998）,猪（Onishi,2000），山羊（张涌等，2000）等相继成功。 History of Nuclear Transfer 2 动物克隆技术程序 2.1 供核细胞的选择和处理 2.1.1 胚胎卵裂球作为核供体 原 理：早期胚胎卵裂球细胞是全能性的，是一种未分化的细胞。 面对问题：供核细胞如何选择？ 解决途径：一般选择桑椹胚前的细胞或后期胚胎中的内细胞团(inner cell mass) 面对问题：如何协调卵母细胞质与植入的细胞核之间的相互作用？ 解决途径：研究发现，与卵母细胞周期处于同一时期的核能更好的实现再程序化(reprogramming)。早期胚胎的卵裂球细胞可能处于各种时期，因此可用一些化学试剂对胚胎细胞进行诱导，而使它们的周期同步化。 方法一：M期同步法。常用噻氨酯达唑（nocodazole）、乙酰甲基秋水仙碱（colcemid）。 方法二：G1期同步法。阿菲迪霉素（aphidicolin）和羟基脲(hydroxyurea)。可使胚胎细胞分裂停止在G1/S转折期。 方法三：G2期同步法。放线菌酮（cycloheximide，CHX）、6-甲基氨基嘌呤（6-dimethylaaminopurine，DMAP）。 2.1.2 胚胎干细胞作为核供体 胚胎干细胞（embryonic stem cell, ES）来源于早期胚胎内细胞团，具有与内细胞团细胞相同的发育潜能和正常核型，又可以在体外增殖。 面对问题：ES细胞系的建立。 研究现状：小鼠上已建立起ES细胞系，并有传代至12代的仔鼠产生（Nagy,1993），但在家畜上至今尚未有真正的ES细胞核移植体系建立。在猪（Gerfen,1995