水稻xa13互作蛋白osp20l和oshmgb1的功能解析-植时物病理学专业毕业论文.docxVIP

2．3．4 2．3．4 DNA纯化及回收 ．2l 2．3．5 PCR产物连接反应 ．．2l 2．3．6 PCR阳性鉴定 ．．2l 2．4 RT-PCR和定量PCR分析 2l 2．5水稻基因的克隆与转化 22 2．5．1超量表达载体的构建 一22 2．5．2抑制表达载体的构建 一22 2．5．3农杆菌介导的遗传转化 一23 2．5．4转基因植株的阳性检测 一23 2．6白叶枯病菌接种与细菌生长分析 23 2．7表达谱测序的样品 24 2．7．1 RNA样品的制备 ．24 2．7．2 RNA样品的检测 ．24 2．7．3 RNA．seq测序流程 24 2．7．4 RNA．seq测序数据的分析 25 2．7．5差异表达基因的筛选 ．．25 3结果与分析 26 3．1互作蛋白OsP20L的功能分析 ．26 3．1．1 D置P2比基因的功能预测 ．26 3．1．2 OsP20L基因超量和抑制表达载体的构建 ．26 3．1．3 OsP20L基因超量和抑制表达转基因植株的获得 ．27 3．1．4 OsP20L基因参与水稻白叶枯病反应 ．28 3．1．4．1显性Xal3背景下OsP20L基因的抑制表达分析 28 3．1．4．2显性Xal3背景下D妒2钇基因的超量表达分析 ．33 3．1．4．3隐性xal3背景下OsP20L基因的超量表达分析 34 3．1．4．3隐性xal3基因背景下OsP20L基因的抑制表达分析 38 3．1．4．4细菌生长分析 39 3．2互作蛋白OsHMGBl的功能分析 40 3．2．1侥E掀珏J7基因的功能预测 40 3．2．2 OsHMGBl基因超量和抑制表达载体的构建 41 万方数据 3．2．3仍悦懈B』基因超量和抑制表达转基因植株的获得 3．2．3仍悦懈B』基因超量和抑制表达转基因植株的获得 41 3．2．4仍悦掀翘．f参与水稻白叶枯病反应 42 3．2．4．1显性Xal3背景下OsHMGBI基因的超量和抑制表达分析 42 3．2．4．2隐性xal3背景下OsHMGBl基因的超量和抑制表达分析 ．．47 3．2．4．3细菌生长分析 52 3．3 Xal3、OsP20L和OsHMGBl基因抑制表达的转基因材料表达谱测序分析 一52 3．3．1表达谱测序及其质量评价分析 53 3．3．1．1 RNA样品的提取及质量检测 ．．53 3．3．1．2 RNA．seq测序质量评估 53 3．3．1．3测序饱和度分析 54 3．3．1．3基因覆盖率统计 54 3．3．2差异表达基因分析 一55 3．3．2．1差异表达基因的GO分析 56 3．3．3互作蛋白OsP20L和OsHMGBl在Xal3感病信号中的作用机理探究 58 4{寸论 ．．59 4．1肠J鲥∞8^7：i幻好F陋E订J基因功能的探讨 59 4．2互作蛋白OsP20L和OsHMGBl在Xal3介导的感病过程中的作用 ．．59 4．3互作蛋白OsP20L和OsHMGBl在Xal3介导的感病中的信号路径探讨 ．．60 4．4肠．『鲥协82v：i幻好肋盟丌．f基因的作用机理探讨 一61 4．5 OsP20L和OsHMGB 1参与免疫作用的广谱性探讨 ．．61 5结论 一63 5．1互作蛋白OsP20L和OsHMGBl作为正调控因子参与Xal3介导的感病过程 63 5．2通过表达谱探究Xal3感病的作用机理 ．63 6参考文献 ．．64 附录I 72 附录II ．73 致谢 74 攻读学位期间发表论文情况 一75 万方数据 山东农业大学硕士学位论文中文摘要 山东农业大学硕士学位论文 中文摘要 由黄单胞杆菌水稻致病变种(Xanthomonas oryzae pv．oryzae)引起的白叶枯病是水 稻生产上的重要的细菌性病害，实践经验表明，利用优异抗病基因、培育具有高效广谱 抗性的优质品种是农业生产中防治白叶枯病最经济有效的措施。对白叶枯病抗性基因作 用机理的深入研究可以有效合理利用抗病基因，这对防治水稻病害有重要的科学意义和 应用价值。 水稻白叶枯病抗性基因xal3是一个完全隐性基因，对菲律宾系生理小种6(PX099) 具有专化抗性。其等位基因Xal3能被白叶枯病菌PX099诱导表达，被认为是感病必需 基因。然而其感病的作用机理尚未明晰，本实验室的前期工作中筛选到了XAl3的互作 蛋白OsP20L和OsⅫⅥGBl，结构和同源性分析暗示它们广泛参与植物免疫反应。 为验证互作蛋白OsP20L和OsHMGBl在Xal3介导的水稻对Px099感病过程中的 功能，本研究通过农杆菌介导的遗传转化法分别获得两个互作蛋白在感病材料中花ll 和抗病材料ⅡmBl3中超量和抑制表达的转基因植株。接种实验发现，在感病材料中花 ll中抑制基因OsP20L或OsHMGBl的表达都显著增强了水稻对