马铃薯试管中薯的诱导实验报告.docVIP

PAGE 本科学生综合性实验报告 学号 姓名 学院 生命科学学院 专业、班级 实验小组及成员 实验课程名称 植物组织培养实验 教师及职称 龙维彪（讲师） 开课学期 2011 至 2012 学年 下 学期 填报时间 2012 年 6 月 26 日 云南师范大学教务处编印 实验序号 一 实验名称 马铃薯试管薯的诱导 实验时间 2012.03.15—2012.06.26 实验室 实验室325 实验内容 1-1 MS培养基母液和常用试剂的配制 1-2 马铃薯试管苗快速繁殖培养基的配制 1-3 马铃薯试管苗的快速繁殖 1-4 马铃薯试管薯的诱导 实验目的 通过本次实验，能熟练准确配制MS培养基母液和组培室常用的化学试剂，巩固相关理论基础知识。 通过本次实验，掌握配制培养基的步骤，能熟练准确配制培养基，并能根据实验目的设计适合的培养基配方。 通过本次实验，掌握无菌操作的基本技术。 了解马铃薯脱毒种薯生产的过程，为马铃薯脱毒种薯的生产提供必要的基础苗。 实验原理、实验流程或装置示意图 实验原理 培养基是植物离体培养组织和细胞赖以生存的营养基质。配制培养基时，为了减少试剂称取时的工作量和少量称取时出现的误差，以及避免多种营养成分混合导致沉淀产生或相互反应而失去培养效果，预先要将各种营养成分配制为一定倍数的培养基母液，待使用时稀释到要求的浓度。母液的浓度为培养基浓度的10倍、100倍或更高。 将事先配制好的培养基母液按一定比例稀释至浓度为培养基中规定的使用浓度，再加入琼脂、蔗糖、生长调节物质等，制备成符合要求的培养基。 利用适宜的培养基，诱导带有腋芽的马铃薯单节茎段进行芽生长和根再生形成单苗，从而达到快速繁殖的目的。 实验流程 1）目前，不论液体培养还是固体培养，大多数植物组织培养中所用的培养基都是由无机营养物、碳源、维生素、生长调节物质和有机附加物等几大类物质组成。 A配制培养基的最简单的方法是用市售培养基干粉溶解在蒸馏水里，加上蔗糖、琼脂和其他必要的补加物，再加入蒸馏水使之达到最终的容积。最后调节pH值，高压灭菌，于是制成所需要的培养基。 B如果没有培养基干粉，则可采用以下两种方法来配制： 一个是按照配方规定的数量分别称量出各种成分，分别使它们溶解于水，然后再将它们混合在一起。 另一个是先配制一系列的浓缩贮备液（母液），贮存在2～4℃冰箱内，待配培养基时取出，按比例稀释配用。此法较为常用。 2）MS基本培养基的配置 A．MS培养基母液的准备： 配制培养基时先将事先配制贮存的母液按顺序放好，并检查这些母液是否已变色或产生沉淀或产生结晶，已失效的就不要取用。MS培养基母液包括大量元素母液、微量元素母液、铁盐母液、有机物母液。 B．用具用品的准备 将洁净的各种用具如三角瓶、果酱瓶、量筒、烧杯、吸管、玻璃棒、医用口杯、精密pH试纸、封口膜、橡皮筋、电炉等准备好放在指定的位置。再将蒸馏水、琼脂、蔗糖、生长调节物质、1mol·L-1NaOH、1mol·L-1HCl准备好。 一．实验设计方案 C．按照配方配置MS基本培养基 3）培养基的配置 按照配方 MS基本培养基＋0.7％琼脂＋3％蔗糖配置培养基 分装灭菌备用 4）马铃薯脱毒试管苗的快速繁殖实验操作流程： 准备工作：外植体，实验用具用品，培养基等的准备 无菌操作：外植体，实验用具等的消毒 实验设备及材料 1）实验用具和仪器： 冰箱、普通天平、分析天平、各种型号的试剂瓶（棕色和白色）、移液管、量筒、烧杯、容量瓶、搪瓷杯、药勺、称量纸、玻棒、标签纸、pH试纸（pH5.4~7.0）、三角瓶、果酱瓶、玻璃棒、封口膜、棉线、酒精棉球、小块纱布、枪状镊子、手术剪、解剖刀、已灭菌培养皿、酒精灯、电磁炉、超净工作台、高压蒸汽灭菌锅等。 2）药品和试剂： 硝酸铵、硝酸钾、氯化钙、硫酸镁、磷酸二氢钾、碘化钾、硫酸锰、硫酸锌、钼酸钠、硫酸铜、氯化钴、乙二胺四乙酸二钠、硫酸亚铁、甘氨酸、盐酸硫胺素、盐酸吡哆素、烟酸、肌醇、2,4-D(2,4-二氯苯氧乙酸)、NAA（α-萘乙酸）、 6-BA （ 6-苄基腺嘌呤）、浓盐酸、氢氧化钠、95%酒精、75%消毒酒精、、琼脂、蔗糖、生长调节物质、蒸馏水、1mol·L-1HCl、1mol·L-1NaOH、MS培养基母液、马铃薯快速繁殖培养基 3)材料：马铃薯脱毒试管苗 实验方法步骤及注意事项 实验方法步骤 一