真菌耐药监测2014.pptVIP

单细胞真菌 single-celled fungi 单细胞真菌 single-celled fungi 多细胞真菌 Multi-cellular fungi 真菌耐药性的产生机制： （1）真菌细胞内药物累积减少； （2）药物靶酶产生增多或靶酶结构改变； （3）靶酶的缺失，导致细胞代谢途径的改变； （4）生物被膜形成； （5）细胞壁的合成障碍； （6）细胞应激反应。 体外活性测定指标 真菌药敏试验测定方法 肉汤液基稀释法—CLSI M27-A2，M38-A 琼脂稀释法 纸片扩散法—CLSI M44-A E－test法 标准化药敏方法需考虑— 培养基 菌接种量 培养条件/方法 药物 质控 标准化的药敏方法 肉汤稀释法 可以提供更多的有关菌体对各种不同抗生素的定量信息，特别是可以给出相关抗生素的具体的抑菌浓度。 -使用肉汤稀释法进行不同药物的抗菌活性的检测时，需将待测菌加到一系列试管中，其中含有定量浓度的经倍比稀释的药物，如稀释前的药物浓度为64ug/ml,其后每次取出前一管体积一半的液体加入等体积的培养基再次进行稀释，即倍比稀释使药物含量变为32ug/ml,如此反复。 纸片扩散法 是将含有定量抗真菌药物的纸片置于接种定量真菌的平皿中，在一定温度下经过一定时间孵育后，通过测量抑菌圈的大小来判断受试真菌对于该药物的敏感性； 该方法简单直观，已有商品化试剂； 缺点是不能精确量化。 琼脂稀释法 是将一定量的真菌接种于含有不同浓度抗真菌药物的平皿中，在一定的温度下经过一定时间孵育后，判断受试真菌对于该药物的敏感性 该方法简单，但用药量大，而且难以精确量化，尤其对于抑真菌剂 判断抗真菌药敏试验的结果 真菌对抗真菌药物是敏感还是耐药的判断，主要是通过将试验得出的MIC值同确定的药折点（break point）进行比较分析得出，不同药物的折点有不同的标准，常用的是是由NCCLS/CLSI制定的标准。 折点是根据抗真菌药物抑制真菌生长所需要的MIC。结合常用剂量时该药在人体内所能达到的血药浓度划分病原真菌对各种抗真菌药物敏感和耐药的界线。 是根据体外试验对药物在人体的临床疗效作出的预测。 根据折点判断结果 敏感(S) 耐药(R) 中介(I) 剂量依赖性敏感（S-DD） 判断抗真菌药的敏感性和耐药性 抗真菌药的疗效受多种因素的影响 体内组织浓度 感染部位的病原菌浓度 疾病诊断的准确性 疾病的严重性，有无并发症 机体的免疫功能 不良反应的耐受性 其它的治疗措施 抗真菌体外药敏试验的临床意义 药敏试验对临床有一定指导意义 抗真菌药敏试验与抗真菌治疗疗效的相关性尚未明确 不能单纯根据其MIC值来预测临床疗效 真菌体外药敏试验方法尚未完全成熟 由于疾病和人体的复杂性，很难确定体外抗菌活性和临床治疗结果之间的关系 体外抗真菌药敏试验与体内疗效 “90-60原则”—MIC值与临床疗效 药敏试验敏感菌株：90%对治疗有效 药敏试验耐药菌株：60%对治疗有效 E-test真菌药敏试条 生产商 AB BIODISK，瑞典 原 理 属琼脂扩散法的改良，培养基采用RPMI 1640加2%的葡萄糖和1.5%的琼脂糖，用MOPs调节pH到7.0。药敏纸片采用包被梯度浓度抗真菌药物的试纸条。 适用范围 念珠菌、隐球菌和丝状真菌 检测药物 包括两性霉素B、5-氟胞嘧啶、氟康唑、伊曲康唑和酮康唑 MIC E-test 检测曲霉的MIC 将不同量的抗真菌药物包被在特殊试剂条上， 该方法操作简单、直观，与NCCLS法有较好的一致性 S-DD： Susceptible-Dose Dependent 剂量依赖性敏感，是指提高给药剂量后， 血液及组织中的药物浓度仍可 高于MIC浓度，即体内敏感。 NCCLS/CLSI肉汤稀释法测定念珠菌体外敏感试验的临界浓度判读 =4 - 2 =1 伏立康唑 16 8-16 - =4 氟胞嘧啶 0.5 - 0.25-0.5 =0.125 伊曲康唑* =32 - 16 =8 氟康唑 耐药 R 中介 I 剂量依赖性敏感 SDD 敏感 S MIC（μg/ml） 判断抗真菌药的敏感性和耐药性 NCCLS/CLSI纸片扩散法测定念珠菌体外敏感试验 的临界浓度判读 =13 14-16 =17 伏立康唑 =14 15-18 =19 氟康唑 耐药 R 剂量依赖性敏感 SDD 敏感 S 抑菌菌直径（mm） 临床抗真菌药物耐药现况 在临床上，真菌感染率的上升，提高了对抗真菌药物的使用率，随之而来耐药菌株也不断增多，给临床的治疗带来一定的困难； 最近科学家证实：某些能够引起致命感染的曲霉菌对目前的抗真菌药已有耐药性，而且这种耐药性正以惊人的速度蔓延。 抗真菌药物的化学分类 分类 代表药物 中文名 外文名 多烯类 两性霉素B A